Применение и использование принципов флуоресцентного микроскопа
Принципы и структурные характеристики флуоресцентных микроскопов. В флуоресцентных микроскопах используется точечный источник света с высокой светоотдачей для излучения света определенной длины волны (например, ультрафиолетового света длиной 3650 дюймов или пурпурно-синего света длиной 4200 дюймов) через систему цветных фильтров в качестве возбуждающего света для возбуждают флуоресценцию образца. После того как вещество излучает флуоресценцию различных цветов, его затем наблюдают посредством увеличения объектива и окуляра. Таким образом, на сильном контрастном фоне, даже если флуоресценция очень слабая, ее легко идентифицировать и она имеет высокую чувствительность. Он в основном используется для изучения структуры и функции клеток, а также химического состава. Базовая конструкция флуоресцентного микроскопа состоит из обычного оптического микроскопа и некоторых аксессуаров (таких как источник флуоресцентного света, фильтр возбуждения, двухцветный светоделитель, блокирующий фильтр и т. д.). Флуоресцентный источник света - обычно используется ртутная лампа сверхвысокого давления (от 50 до 200 Вт), которая может излучать свет различной длины волны, но каждое флуоресцентное вещество имеет длину волны возбуждения, которая дает самую сильную флуоресценцию, поэтому используется фильтр возбуждения (обычно существуют ультрафиолетовые, фиолетовые, синие и зеленые фильтры возбуждения), которые пропускают возбуждающий свет только определенной длины волны и освещают образец, поглощая при этом весь остальной свет. После того, как каждое вещество облучается возбуждающим светом, оно за очень короткое время излучает видимую флуоресценцию с длиной волны, большей, чем длина волны облучения. Флуоресценция специфична и обычно слабее, чем возбуждающий свет. Для наблюдения специфической флуоресценции за объективом необходим блокирующий (или подавляющий) фильтр. Он имеет две функции: первая — поглощать и блокировать попадание возбуждающего света в окуляр, чтобы не нарушать флуоресценцию и не повредить глаза; другой - выбрать и пропустить определенную флуоресценцию, чтобы показать определенный цвет флуоресценции. Оба фильтра необходимо выбрать и использовать вместе.
