Применение флуоресцентной флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения
TIRFM (флуоресцентный микроскоп полного внутреннего отражения), флуоресцентный микроскоп полного внутреннего отражения, когда свет попадает в среду с более низким показателем преломления из среды с высоким показателем преломления, если угол падения достаточно велик, весь свет отражается без преломления, но на границе раздела двух сред возникают затухающие волны, которые могут возбудить флуоресценцию в пределах 100 нм вблизи границы раздела, чтобы реализовать наблюдение за поверхностью объекта. Возбуждающий свет можно подавать через осветитель обычного флуоресцентного микроскопа или специальный осветитель, а угол падения лазера можно контролировать. Метод мгновенного возбуждения поля используется для предотвращения попадания возбуждающего света в детектор. Возбуждение света на границе раздела стекло-вода производит полное внутреннее отражение. Из-за экспоненциального затухания возбуждающего света только область образца, очень близкая к поверхности полного отражения, будет давать флуоресцентное отражение, что значительно снижает влияние шума фонового света на цель наблюдения, поэтому эта технология широко используется в динамическом наблюдении. веществ клеточной поверхности.
Принципиальная схема флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения (TIRFM)
①Образец ②Диапазон затухающих волн ③Защитное стекло ④Масляная иммерсия ⑤Мишень ⑥Излучающий пучок (сигнал) ⑦Возбуждающий пучок
Для достижения полного внутреннего отражения требуется большой угол падения, например, угол падения на границе стекло-вода больше 61 градуса. Это может быть достигнуто с помощью призмы, называемой TIRFM на основе призмы, или линзы объектива с высокой числовой апертурой, которая называется TIRFM объективного типа. Современные коммерческие флуоресцентные микроскопы с полным внутренним отражением, как правило, относятся к типу объективов с высокой скоростью и высокой точностью.
Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения широко используется в некоторых биологических областях, поскольку она может осуществлять наблюдение флуоресценции в очень тонком диапазоне (менее 100 нм) на поверхности объектов. Например, следующие приложения:
Наблюдение за изображениями клеточной поверхности: структура поверхности клеточной мембраны, контакт клеточной поверхности, динамика поверхности мембраны/локализация белков.
Наблюдение за отдельными молекулами и манипулирование ими: миозин, актин и Cy3-меченый АТФ.
Поверхностное движение клеточной мембраны: поглощение везикул, выдох везикул и экзокринный везикул. в
Наблюдение феномена искрообразования кальция в клеточной мембране, мониторинг ионных каналов.
Молекулярно-моторные исследования: вращательные моторы, цитоскелетные белки, полимеры, G-белки, кольцевые белки, нуклеотидные моторы.
Помимо области биологии, он также имеет хорошие применения в области химии для наблюдения за химическими молекулярными структурами.
