Биомикроскопия по объему тканевых блоков
Биологическая микроскопия До сих пор холодная фиксация, замороженные ультратонкие срезы и лиофилизация являются обычными методами рентгеновских микросрезов тканей и клеток. Детали этого метода объясняются следующим образом:
В биологических микроскопах с конденсором конденсор можно перемещать вверх и вниз, чтобы сделать яркость умеренной, а апертуру переменного света также можно изменять для достижения умеренной яркости 9b. Если свет солнечный, конденсор можно поднять соответствующим образом, а апертуру переменного источника света можно соответствующим образом увеличить. Если свет слишком яркий, конденсорную линзу можно соответствующим образом опустить, а апертуру пересекающегося света можно соответствующим образом уменьшить. Если вы все же чувствуете ослепление в этом случае, вы можете выбрать подходящий фильтр и установить его на кронштейн под конденсатором. Этот дуб сможет получить тот блеск, который вас удовлетворит. Конечно, регулировка верхнего и нижнего положения конденсора, регулировка размера апертуры переменного оптического показания и выбор подходящего фильтра требуют определенного периода практики для приобретения опыта.
Очень важным вопросом биологической микроскопии является то, что в процессе отбора и разделения клеток, после лиофилизации и заливки в смолу (ФД), после замораживания ультратонких агрегатов и после лиофилизации содержание 65 элементов в каждой части необходимо аккуратно обращаться. Анализируемые клетки не могут быть повреждены. Потому что рентгеновский микроанализ не только включает в себя множество этапов, но и стоит немало. Если анализируемые клетки представляют собой поврежденные клетки или мертвые клетки после длительной и многоэтапной обработки, очень прискорбно сделать неправильные выводы. Например, кардиомиоциты, разделенные обработкой коллагеназой, имеют две формы: одну — длинную палочковидную, а другую — круглую. Последние представляют собой умирающие клетки, повреждающиеся при выделении клеток.
Биомикроскопия. Количество и распределение электролитов в этих двух типах клеток весьма различны. В круглых кардиомиоцитах содержание Na очень высокое, а К очень низкое, а концентрация Са в нематодах очень высока. После проверки другими методами анализа доказано, что высокий уровень Na и низкий уровень K в круглых клетках и высокий уровень Ca в митохондриях обусловлены повреждением клеточной мембраны в процессе разделения клеток. Метод ледяной фиксации клеток и тканей обычно заключается в сначала закалке и фиксации, а затем хранении их в жидком азоте. Закалочная фиксация очень важна для эффекта консервации. Живые клетки или свежие ткани богаты водой. При закалке части клеток или тканей, находящиеся в непосредственном контакте с измельченным хладагентом (особенно при закалке жидким азотом), часто замораживаются и фиксируются первыми, образуя таким образом «оболочку», которая препятствует центральным частям клеток измельченные и подвергнутые холодной фиксации. Поэтому при анализе микроплощадей по X-линии часто обнаруживается, что в центре более крупных ячеек находятся кристаллы льда. Чтобы этого не произошло, в качестве разрушаемого хладагента используется вещество с температурой плавления выше, чем у жидкого азота, но ниже, чем у 806с. Таких веществ много, но самым дешевым является концентрированный пропан (температура кипения - 42.120c, температура плавления - 187.10c, молекулярная масса 44,1), а скорость охлаждения самая быстрая. Но его недостаток в том, что он горюч.
Биологический микроскоп может поместить мышечное волокно на специальную стойку, чтобы, когда сокращение мышечного волокна достигнет определенной фазы и его необходимо зафиксировать, немедленно запустить сопло для распыления жидкого пропана на мышечное волокно для его охлаждения и фиксации. Затем мышечные волокна вместе с каркасом извлекали и помещали в жидкий азот. При фиксации клеток крови или изолированных клеток сначала сконцентрируйте клетки центрифугированием на низкой скорости, перенесите клетки в серебряный флакон с хорошей теплопроводностью, поместите флакон в жидкий пропан и заморозьте для фиксации. При фиксации поджелудочной железы крысы в лаборатории Холла два стальных блока предварительно охлаждали жидким гелием (или жидким азотом), а два медных блока зажимали щипцами и помещали на переднюю и заднюю часть поджелудочной железы для закалки и фиксации. поджелудочная железа. Ткани или клетки можно хранить в жидком азоте для длительного хранения после закалки и фиксации.
Биологическая микроскопия Помимо наиболее уважаемого метода замороженных ультратонких срезов, ученые используют еще один метод осаждения. Вещество добавляется для образования осадка с анализируемым компонентом для его иммобилизации перед анализом, а затем осадок анализируется. Например, люди часто используют оксалат и пироантимонат для отложения кальция в мышечных клетках. Первый недостаточно чувствителен к низкой концентрации Са в цитоплазме; пироантимонат более чувствителен и может образовывать электронно-плотные отложения со свободным Са в головном мозге, но пироантимонат не совместим с натрием, марганцем, барием, железом. Отложения также образуются и менее специфичны. Процесс подготовки образцов аналогичен приготовлению образцов ультратонких срезов для обычного трансмиссионного электронного микроскопа, разница состоит в том, что 3-процентный пироантимонат калия (фосфатный буферный раствор, pH 7,6) фиксируется в течение 6 часов перед фиксацией, а на окрашенных ультратонких срезах мышц Черные отложения наблюдались по средней линии полос А и 2 каждого саркомера, а неокрашенные срезы использовали для рентгеновского микроанализа. Диаминобензидина тетрагидрохлорид (DAB) использовали для осаждения гемсодержащих веществ и т.п. Сочетание гистохимической реакции осаждения и рентгеновского микродифференцировочного мостика можно рассматривать в лабораториях, где нет условий замораживания ультратонких срезов. Полуколичественный анализ может быть выполнен в зависимости от высоты пика анализируемых элементов.
