Определение количества микроорганизмов-Микроскопический метод прямого подсчета!
Рост популяции бактерий проявляется увеличением числа клеток или увеличением клеточного материала. Методы определения количества клеток включают прямой микроскопический подсчет, подсчет на чашках, оценку мутности с помощью спектрофотометра, определение наиболее вероятного числа MPN и мембранную фильтрацию. (мембранная фильтрация) и т. д. Методы измерения клеточных веществ включают определение сухой массы клеток, определение определенных компонентов клетки, таких как содержание азота, содержание РНК и ДНК, а также определение продуктов метаболизма. Короче говоря, существует множество методов измерения роста микробов, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Метод следует выбирать в соответствии с конкретными требованиями работы. Этот эксперимент в основном знакомит с методом прямого счета микроскопа, который обычно используется в производстве и научно-исследовательской работе.
1. Целевые требования
1. Разъяснить принцип подсчета клеток крови на доске для подсчета клеток крови.
2. Освоить метод подсчета микроорганизмов с помощью счетной доски для клеток крови.
2. Основные принципы
Метод прямого подсчета с помощью микроскопа — это простой, быстрый и интуитивно понятный метод, при котором небольшое количество суспензии исследуемого образца помещается на специальное предметное стекло с определенной площадью и объемом (также называемое бактериометром) и подсчитывается непосредственно под микроскопом. Методы. В настоящее время в стране и за рубежом широко используются бактериометры: гемоцитометр, бактериометр Петерова-Хаузера, бактериометр Хоксли и т. д. Все они могут использоваться для подсчета дрожжей, бактерий, спор плесени и других суспензий, и основные принципы одинаковы. Последние два бактериальных счетчика имеют общий объем 0.02 мм3 после накрытия покровным стеклом, а расстояние между покровным стеклом и предметным стеклом составляет всего 0,02 мм. Таким образом, объектив с масляной иммерсией можно использовать для наблюдения и обнаружения более мелких клеток, таких как бактерии. считать. Помимо использования этих бактериометров, существует также метод оценки, который позволяет непосредственно наблюдать под микроскопом соотношение площади мазка к площади поля зрения. Этот метод обычно применяют для бактериологического исследования молока. Преимущества метода прямого счета микроскопа заключаются в том, что он интуитивно понятен, быстр и прост в использовании. Однако недостатком этого метода является то, что измеренный результат обычно представляет собой сумму мертвых и живых бактерий. В настоящее время существуют некоторые методы преодоления этого недостатка, такие как сочетание окрашивания жизнеспособных бактерий в микрокамерной культуре (короткое время) и добавление ингибиторов деления клеток для достижения цели подсчета только жизнеспособных бактерий.
В этом эксперименте в качестве примера используется гемоцитометр для проведения прямого подсчета под микроскопом. Для использования двух других бактериометров обратитесь к инструкциям каждого производителя. Прямой подсчет под микроскопом с использованием гемоцитометра является широко используемым методом подсчета микроорганизмов. Счетная доска представляет собой специальную направляющую с четырьмя пазами, образующими три площадки; более широкая платформа посередине разделена на две половины короткой горизонтальной канавкой, а с каждой стороны платформы имеется решетчатая решетка. Каждая квадратная сетка разделена на девять больших квадратов, а большой квадрат посередине — это счетная комната. Структура доски для подсчета клеток крови показана на рисунке {{0}}. Обычно существует две спецификации шкалы счетной камеры. Один представляет собой большой квадрат, разделенный на 25 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделен на 16 маленьких квадратов (рис. 15-2); другой - большой квадрат. Квадратная сетка разделена на 16 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделен на 25 маленьких квадратов. Однако какая бы счетная доска ни была, в каждом большом квадрате 400 маленьких квадратов. Длина стороны каждого большого квадрата равна lмм, тогда площадь каждого большого квадрата равна lmm2. После закрытия покровного стекла высота между покровным стеклом и предметным стеклом составляет 0,1 мм, следовательно, объем счетной камеры составляет 0,1 мм3 (одна десятитысячная миллилитра). Рисунок 15-1 Структура панели для подсчета клеток крови (1) Рисунок 15-2 Структура панели для подсчета клеток крови (2) A. Вид спереди; Б. Продольный разрез; увеличенная квадратная сетка, большой квадрат посередине представляет собой счетную камеру 1. Доска для подсчета клеток крови; 2. Покровное стекло; 3. При подсчете в счетной камере обычно подсчитывают общее количество бактерий в пяти квадратах, затем находят среднее значение каждого квадрата, а затем умножают на 25 или 16, чтобы получить общее количество бактерий в большом квадрате, затем преобразуется на общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора. Предположим, что общее количество бактерий в пяти средних квадратах равно А, а коэффициент разведения бактериального раствора равен В. Если это счетная пластинка с 25 средними квадратами, то общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (шт.) Аналогично, если это счетная пластинка с 16 квадратами, общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора {{ 30}}А/5×16×104×В=32000А·В (штук),,
