Разница между флуоресцентным микроскопом и обычным оптическим микроскопом
Разница в флуоресцентном микроскопе и обычном оптическом микроскопе. Флуоресцентный микроскоп и обычный оптический микроскоп отличаются тем, что для наблюдения за образцом используется не освещение обычного источника света, а использование определенной длины волны света (обычно ультрафиолетового, сине-фиолетового). возбуждение образца под микроскопом внутри флуоресцентного материала, так что он излучает флуоресцентный свет, поэтому роль флуоресцентного микроскопа в источнике света заключается не в прямом освещении, а в своего рода стимуляции флуоресценции образцов внутреннего света. Источником флуоресцентного микроскопа является не прямое освещение, а источник энергии для стимуляции флуоресцентного вещества внутри образца. Причина, по которой мы можем наблюдать образец, связана не с освещением источника света, а с явлением флуоресценции, представленным флуоресцентным веществом в образце после поглощения энергии возбужденного света. Можно видеть, что характеристики флуоресцентного микроскопа заключаются главным образом в том, что его источник света может подавать возбуждающий свет в большом количестве определенных диапазонов длин волн, так что флуоресцентные вещества внутри исследуемого образца могут получать необходимую интенсивность возбуждающего света. При этом флуоресцентный микроскоп должен иметь соответствующую систему фильтров. Флуоресцентный микроскоп является основным инструментом **флуоресцентной гистохимии. Он состоит из источника света сверхвысокого давления, системы фильтров (включая фильтрующую пластину возбуждения и подавления), оптической системы, фотографической системы и других основных компонентов. Это использование определенной длины волны света для стимулирования образца к излучению флуоресценции.
1. способ возбуждения флуоресценции: в зависимости от диапазона длин волн света делятся на метод УФ-возбуждения (с использованием ультрафиолетового освещения) и метод возбуждения BV (с использованием сине-фиолетового света). Два вида метода УФ-возбуждения короче 400 нм ближнего ультрафиолетового света для возбуждение. В этом методе нет видимого возбуждающего света, поэтому наблюдаемая флуоресценция показывает собственную флуоресценцию красителя, и специфическую флуоресценцию на образце легко отличить от собственной флуоресценции фоновой ткани.
2. Метод возбуждения BV: метод основан на длине волны 404 нм, 434 нм от ультрафиолетового до синего света для возбуждения. В этом методе для облучения образца используется синий свет, поэтому отсекающий фильтр системы наблюдения флуоресценции должен использовать фильтр, который может полностью блокировать синий свет и полностью пропускать желаемую зеленую и желтую флуоресценцию. Флуоресцентные пигменты для метода флуоресцентных антител. Поскольку длина волны максимального поглощения возбуждающего света и длина волны максимального излучения флуоресценции близки друг к другу, фильтры, используемые в методе БВ-возбуждения, должны быть фильтрами с резкой обрезкой. В этом методе в качестве возбуждающего света используется синий свет, поэтому эффективность поглощения флуорохрома выше и можно получить более яркое изображение. Недостатком является то, что флуоресценцию ниже 500 нм невозможно увидеть, а при длине волны выше 500 нм все изображение кажется желтым. В методе флуоресцентных антител большая часть специфичности оценивается по цвету, уникальному для флуорохрома, поэтому недостатки метода возбуждения BV, описанного выше, имеют тенденцию быть чрезвычайно влиятельными при обсуждении тонкой специфичности.
