Метод прямого подсчета микроорганизмов с помощью микроскопа
Использование гемоцитометра для непосредственного подсчета микроорганизмов под микроскопом является широко используемым методом подсчета микроорганизмов. Плюсом этого метода является его интуитивность и скорость. Поместите соответствующим образом разбавленную бактериальную суспензию (или суспензию спор) в счетную камеру между предметным стеклом гемоцитометра и покровным стеклом и подсчитайте под микроскопом. Благодаря постоянному объему счетного помещения (0,1 мм2), общее количество микроорганизмов в единице объема может быть пересчитано на основе количества микроорганизмов, наблюдаемых под микроскопом. Поскольку этот метод рассчитывает сумму живых и мертвых бактериальных клеток, он также известен как метод общего подсчета бактерий.
Пластина для подсчета клеток крови обычно представляет собой специально разработанное предметное стекло с четырьмя канавками, образующими три платформы. Средняя платформа разделена пополам короткой горизонтальной канавкой, на каждой стороне платформы выгравирована сетка. Каждая сетка разделена на девять больших квадратов, а большой квадрат посередине представляет собой комнату для подсчета микроорганизмов. Структура пластины для подсчета клеток крови показана на рисунке VIII-1.
Обычно существуют две характеристики масштаба счетной комнаты. Во-первых, большой квадрат делится на 16 средних квадратов, а каждый средний квадрат делится еще на 25 маленьких квадратов (рис. VIII-2); Другой метод состоит в том, чтобы разделить большой квадрат на 25 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделить еще на 16 маленьких квадратов (рис. VIII-1, В). Но независимо от размера счетной доски количество маленьких квадратов в каждом большом квадрате одинаково, то есть 16 × 25=400 маленьких квадратов, как показано на рисунке VIII-2.
Если длина стороны каждого большого квадрата равна 1 мм, то площадь каждого большого квадрата равна 1 мм2. После закрытия покровным стеклом высота между предметным стеклом и покровным стеклом составляет 0,1 мм, следовательно, объем счетной комнаты составляет 0,1 мм3.
При подсчете обычно подсчитывают общее количество бактерий в пяти квадратах, а затем получают среднее значение каждого квадрата. Умножение на 16 или 25 дает общее количество бактерий в большом квадрате, которое затем преобразуется в общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора.
