Повышение преимуществ многофотонной лазерной сканирующей микроскопии
Лазерная сканирующая многофотонная микроскопия является значительным усовершенствованием по сравнению с оптической микроскопией. Он может наблюдать глубокую структуру живых клеток, фиксированных клеток и тканей, а также получать четкие и четкие многослойные структуры Z-плоскости, то есть оптические срезы, из которых он может построить трехмерную твердую структуру образца. В конфокальной микроскопии используется источник лазерного света, который после расширения заполняет всю заднюю фокальную плоскость объектива, а затем проходит через систему линз объектива, сходясь в очень маленькую точку на фокальной плоскости образца. В зависимости от числовой апертуры объектива диаметр самого яркого пятна освещения составляет около 0,25 ~ 0,8 мкм, а глубина — около 0,5 ~ 1,5 мкм. . Размер конфокального пятна зависит от конструкции микроскопа, длины волны лазера, характеристик объектива, настроек состояния сканирующего устройства и свойств образца. Диапазон освещения и глубина освещения полевого микроскопа велики, тогда как освещение конфокального микроскопа сосредоточено в точном фокусе в фокальной плоскости. Самым основным преимуществом конфокальной микроскопии является то, что она позволяет выполнять тонкие оптические срезы толстых флуоресцентных образцов (которые могут достигать 50 мкм и более), а толщина срезов составляет от 0,5 до 1,5 мкм. Серийные изображения оптического среза можно получить, перемещая образец вверх и вниз с помощью сложного шагового двигателя по оси Z микроскопа. Сбор информации об изображении контролируется в точной плоскости, и на него не влияют сигналы, излучаемые из других мест на образце. После устранения влияния фоновой флуоресценции и увеличения отношения сигнал/шум контрастность и разрешение конфокальных изображений значительно улучшаются по сравнению с традиционными флуоресцентными изображениями с полевой подсветкой. Во многих образцах многие сложные структурные компоненты переплетаются, образуя сложные системы, но как только будет собрано достаточное количество оптических срезов, мы сможем реконструировать их в трех измерениях с помощью программного обеспечения. Этот экспериментальный метод широко использовался в биологических исследованиях для выяснения сложных структурных и функциональных взаимоотношений между клетками и тканями.
