Экспериментальные основы метода прямого подсчета микробной микроскопии
Распространенным методом подсчета микроорганизмов является прямой подсчет под микроскопом с использованием гемоцитометра. Преимущество этого метода в том, что он интуитивно понятен и быстр. Поместите соответствующим образом разбавленную бактериальную суспензию (или суспензию спор) в счетную камеру между предметным и покровным стеклом гемоцитометра и подсчитайте под микроскопом. Поскольку объем счетной камеры фиксирован (0,1 мм2), его можно преобразовать в общее количество микроорганизмов в единице объема, исходя из количества микроорганизмов, наблюдаемых под микроскопом. Поскольку этот метод подсчитывает общее количество живых и мертвых бактерий, его также называют методом общего подсчета бактерий.
Гемоцитометр обычно представляет собой специальное предметное стекло с четырьмя прорезями, образующими три платформы. Средняя площадка разделена на две половины коротким горизонтальным желобом. На платформе с каждой стороны выгравирована квадратная сетка. Каждая квадратная сетка разделена на девять больших квадратов. Большая площадь посередине — это счетная комната. Подсчет микроорганизмов происходит в счетной камере. Структура гемоцитометра показана на рисунке Ⅷ-1.
Шкала счетной камеры обычно имеет две характеристики. Один представляет собой большой квадрат, разделенный на 16 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделен на 25 маленьких квадратов (рис. Ⅷ-2); другой - большой квадрат. Квадратная сетка разделена на 25 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделен на 16 маленьких квадратов (рис. VIII-1, C). Но какая бы счетная доска ни была, количество маленьких квадратов в каждом большом квадрате одинаково, то есть 16×25=400 маленьких квадратов, как показано на рисунке Ⅷ-2.
Длина стороны каждого большого квадрата равна 1 мм, поэтому площадь каждого большого квадрата равна 1 мм². После закрытия покровного стекла высота между предметным стеклом и покровным стеклом составляет 0,1 мм, поэтому объем счетной камеры составляет 0,1 мм3.
При подсчете обычно подсчитывают общее количество бактерий в пяти средних квадратах, затем находят среднее значение каждого среднего квадрата, а затем умножают на 16 или 25, чтобы получить общее количество бактерий в большом квадрате, а затем вычисляют. общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора.
