Отличия и характеристики флуоресцентного микроскопа и обычного оптического микроскопа
Флуоресцентный микроскоп и обычный оптический микроскоп отличаются тем, что для наблюдения за образцом используется не освещение обычного источника света, а использование света определенной длины волны (обычно ультрафиолетового, сине-фиолетового света) для возбуждения флуоресцентного материала внутри образца. под микроскопом, так что флуоресценция источника света флуоресцентного микроскопа играет не прямое освещение, а своего рода возбуждение флуоресцентного материала внутри образца источника энергии. Причина, по которой мы можем наблюдать образец, связана не с освещением источника света, а с явлением флуоресценции, представленным флуоресцентным материалом в образце после поглощения световой энергии возбуждения. Можно видеть, что характеристики флуоресцентного микроскопа, в основном его источник света, могут обеспечить большое количество конкретных диапазонов длин волн возбуждающего света, так что флуоресцентный материал внутри исследуемого образца может получить необходимую интенсивность возбуждающего света. При этом флуоресцентный микроскоп должен иметь соответствующую систему фильтров. Флуоресцентный микроскоп является основным инструментом флуоресцентной гистохимии. Он состоит из источника света сверхвысокого давления, системы фильтров (включая фильтрующую пластину возбуждения и подавления), оптической системы, фотографической системы и других основных компонентов. Это использование определенной длины волны света для стимулирования образца к излучению флуоресценции.
1. способ возбуждения флуоресценции: в зависимости от диапазона длин волн света делятся на метод УФ-возбуждения (с использованием ультрафиолетового освещения) и метод возбуждения BV (с использованием сине-фиолетового света). Два вида метода УФ-возбуждения короче 400 нм ближнего ультрафиолетового света для возбуждение. В этом методе нет видимого возбуждающего света, поэтому наблюдаемая флуоресценция показывает собственную флуоресценцию красителя, и специфическую флуоресценцию на образце легко отличить от собственной флуоресценции фоновой ткани.
2. Метод возбуждения BV: метод основан на длине волны 404 нм, 434 нм от ультрафиолетового до синего света для возбуждения. В этом методе для облучения образца используется синий свет, поэтому отсекающий фильтр системы наблюдения флуоресценции должен использовать фильтр, который может полностью блокировать синий свет и адекватно пропускать желаемую зеленую и желтую флуоресценцию. Флуоресцентные пигменты для метода флуоресцентных антител. Поскольку длина волны максимального поглощения возбуждающего света и длина волны максимального излучения флуоресценции близки друг к другу, фильтры, используемые в методе БВ-возбуждения, должны быть фильтрами с резкой обрезкой. В этом методе в качестве возбуждающего света используется синий свет, поэтому эффективность поглощения флуорохрома выше и можно получить более яркое изображение. Недостатком является то, что флуоресценцию ниже 500 нм невозможно увидеть, а при длине волны выше 500 нм все изображение кажется желтым. В методе флуоресцентных антител большая часть специфичности оценивается по уникальному цвету флуорохрома, поэтому недостатки метода возбуждения BV, описанного выше, имеют тенденцию быть чрезвычайно влиятельными при обсуждении тонкой специфичности.
