Флуоресцентные микроскопы можно разделить на два типа в соответствии с принципом оптического пути:
1. Прописывающий флуоресцентный микроскоп
Более старые флуоресцентные микроскопы используют прожектор для возбуждения флуоресценции, передавая источник света возбуждения через материал образца. Его преимущество - сильная флуоресценция при низком увеличении, но его недостаток заключается в том, что его флуоресценция уменьшается с увеличением увеличения. Таким образом, он подходит только для наблюдения за более крупными материалами образца.
2. Флуоресцентный микроскоп падающего света
Свет возбуждения падает с объективного линзы на поверхность образца, используя ту же объективную линзу, что и конденсатор освещения и объектив -объектив для сбора флуоресценции.
Сплиттер с двойным цветовым пучком (дихроичное зеркало) необходимо добавить к оптическому пути, который образует угол 45 градусов с оптической осью. Свет возбуждения отражается в объективной линзе и сфокусирован на образце. Флуоресценция, генерируемая образцом, а также свет возбуждения, отражаемый от поверхности объективного линзы и покрытия стекла, одновременно входит в объектив и возвращается к двойному цветовому лучевому сплитеру, чтобы отделить свет возбуждения и флуоресценцию. Остаточный свет возбуждения затем блокируется поглощением фильтра. Если используются различные комбинации фильтров возбуждения, двойного цветового луча и блокирующих фильтров, они могут удовлетворить потребности различных продуктов флуоресцентной реакции.
Преимущества этого флуоресцентного микроскопа - это равномерное освещение поля, четкая визуализация и более сильная флуоресценция с большим увеличением.
3. Фазовый контрастный микроскоп
Фазовый контрастный микроскоп - это микроскоп, который может преобразовать разность фаз (или разность оптических путей), генерируемую, когда свет проходит через объект в изменения амплитуды (интенсивность света). В основном используется для наблюдения живых клеток, неокрашенных срезов тканей или окрашенных образцов, не имеющих контраста.
Человеческий глаз может лишь различать изменения в длине волны (цвет) и амплитуде видимого света, но не может различить изменения в фазе. Большинство биологических образцов очень прозрачны, а амплитуда световых волн остается в основном неизменной после прохождения, с только фазовыми изменениями.
Фазовый контрастный микроскоп в основном преобразует разность оптических путей видимого света, проходящего через образцы в разницу амплитуды, тем самым улучшая контраст между различными структурами и делает его ясным и видимым. После прохождения через образец свет подвергается преломлению, отклоняясь от исходного оптического пути и задерживается на 1/4 λ (длина волны). Если разность оптических путей увеличивается или уменьшается на еще 1/4 λ, разность оптических путей становится 1/2 λ, а интерференция между двумя лучами света увеличивается или уменьшается после объединения оси, улучшая контраст.
