Чем флуоресцентная микроскопия отличается от конфокальной лазерной микроскопии
Флуоресцентный микроскоп
1. Флуоресцентный микроскоп использует ультрафиолетовый свет в качестве источника света для освещения проверяемого объекта, чтобы он излучал флуоресценцию, а затем наблюдает за формой и расположением объекта под микроскопом. Флуоресцентная микроскопия используется для изучения поглощения и транспорта веществ внутри клеток, а также распределения и позиционирования химических веществ. Некоторые вещества в клетках, например хлорофилл, могут флуоресцировать после облучения ультрафиолетовыми лучами; некоторые вещества сами по себе не могут флуоресцировать, но если их окрасить флуоресцентными красителями или флюоресцентными антителами, они могут флуоресцировать после облучения ультрафиолетовыми лучами. Флуоресцентная микроскопия является одним из инструментов качественного и количественного исследования таких веществ.
2. Принцип флуоресцентного микроскопа:
(A) Источник света: Источник света излучает свет различной длины волны (от ультрафиолетового до инфракрасного).
(B) Источник света с фильтром возбуждения: пропускает свет определенной длины волны, который может вызвать флуоресценцию образца, при этом блокируя свет, бесполезный для стимуляции флуоресценции.
(C) Флуоресцентные образцы: Обычно окрашены флуоресцентными пигментами.
(D) Блокирующий фильтр: блокирует возбуждающий свет, который не поглощается образцом, и избирательно пропускает флуоресценцию. Некоторые длины волн флуоресценции также передаются избирательно. Микроскоп, использующий ультрафиолетовый свет в качестве источника света, вызывающий флуоресценцию освещенного объекта. Электронный микроскоп был впервые собран в 1931 году в Берлине, Германия, Кнорром и Халловской. В этом микроскопе вместо светового луча используется высокоскоростной электронный луч. Поскольку длина волны потока электронов значительно короче, чем у света, увеличение электронного микроскопа может достигать 800,000 раз, а минимальный предел разрешения составляет 0,2 нанометра. Сканирующий электронный микроскоп, который начали использовать в 1963 году, позволяет людям видеть мельчайшие структуры на поверхности объектов.
3. Область применения: используется для увеличения изображений мелких объектов. Обычно используется при наблюдении за биологией, медициной, микроскопическими частицами и т. д.
конфокальный микроскоп
1. В конфокальном микроскопе на оптическом пути отраженного света добавляется полуотражающая полулинза, которая преломляет отраженный свет, прошедший через линзу, в других направлениях. В фокусе находится перегородка с точечным отверстием, а в фокусе, за перегородкой, находится фотоумножитель. Можно представить, что отраженный свет до и после фокуса света обнаружения проходит через эту конфокальную систему и не может быть сфокусирован на небольшом отверстии и будет блокироваться перегородкой. Итак, фотометр измеряет интенсивность отраженного света в фокусе.
2. Принцип: в традиционных оптических микроскопах используются источники полевого света, и на изображение каждой точки образца будет влиять дифракция или рассеянный свет от соседних точек; Лазерные сканирующие конфокальные микроскопы используют лазерные лучи для формирования точечных источников света через точечные отверстия для освещения внутренней части образца. Каждая точка фокальной плоскости сканируется, и освещенная точка на образце отображается в точечном отверстии для обнаружения, которое принимается поточечно или построчно фотоумножителем (ФЭУ) или устройством холодного соединения (cCCD), расположенным за детектором. точечное отверстие, и на экране монитора компьютера быстро формируется флуоресцентное изображение. Осветительное отверстие и точечное отверстие обнаружения сопряжены относительно фокальной плоскости объектива. Точки в фокальной плоскости одновременно фокусируются на точечном отверстии освещения и эмиссионном отверстии. Точки за пределами фокальной плоскости не будут отображаться в точечном отверстии обнаружения. В результате получаются конфокальные изображения, представляющие собой оптические сечения образцов, устраняющие недостатки размытых изображений в обычных микроскопах.
3. Области применения: медицина, научные исследования животных и растений, биохимия, бактериология, клеточная биология, эмбриология тканей, пищевая наука, генетика, фармакология, физиология, оптика, патология, ботаника, нейробиология, морская биология и материаловедение, электроника. , механика, нефтяная геология, минералогия.
