Чем флуоресцентная микроскопия отличается от лазерной конфокальной микроскопии
Флуоресцентный микроскоп
1, флуоресцентный микроскоп заключается в использовании ультрафиолетового света в качестве источника света, используемого для облучения исследуемого объекта, чтобы он излучал флуоресценцию, а затем наблюдения за формой объекта и его расположением под микроскопом. Флуоресцентный микроскоп используется для изучения поглощения, транспорта, распределения и локализации химических веществ в клетках. Некоторые вещества в клетке, например хлорофилл, могут флуоресцировать после облучения ультрафиолетовым светом; есть некоторые вещества, которые не могут флуоресцировать сами по себе, но при окраске флуоресцентными красителями или флуоресцентными антителами могут флуоресцировать и после облучения ультрафиолетом, и флюоресцентная микроскопия является одним из инструментов качественного и количественного исследования такого рода веществ.
2. Принцип флуоресцентного микроскопа:
(А) источник света: источник света излучает свет различной длины (от ультрафиолетового до инфракрасного).
(B) источник фильтра возбуждения: через образец можно производить флуоресценцию света определенной длины волны, блокируя при этом возбуждение флуоресценции бесполезным светом.
(C) Флуоресцентный образец: обычно окрашивается флуорохромом.
(D) Блокирующие фильтры: блокируют возбуждающий свет, который не поглощается образцом, для избирательной передачи флуоресценции, а некоторые длины волн флуоресценции также избирательно передаются. Микроскоп, который использует ультрафиолетовый свет в качестве источника света, чтобы заставить облучаемый объект флуоресцировать. Электронный микроскоп был впервые собран в 1931 году в Берлине, Германия, Кнорром и Хароской. В этом микроскопе вместо светового луча используется высокоскоростной электронный луч. Поскольку длина волны электронного потока намного короче световой волны, увеличение электронного микроскопа может достигать 800,000 раз, минимальный предел разрешения 0,2 нанометра. . В 1963 году начали использовать сканирующий электронный микроскоп, на поверхности которого можно увидеть крошечную структуру объекта.
3. Область применения: используется для увеличения изображения крошечных объектов. Обычно используется в биологии, медицине, микроскопических частицах и других наблюдениях.
Конфокальный микроскоп
1, конфокальный микроскоп в отраженном свете на дороге плюс полуотражающая полулинза, будет проходить через линзу отраженного света, сложенную в других направлениях, в фокусе на перегородке с точечным отверстием, отверстие расположено в фокус, за перегородкой находится фотоумножитель. Можно представить, что отраженный свет до и после фокуса детектора через этот набор конфокальной системы не сможет сфокусироваться на небольшом отверстии и будет заблокирован перегородкой. Таким образом, фотометр измеряет интенсивность отраженного света в фокусной точке.
2, принцип: в традиционном оптическом микроскопе используется полевой источник света, на изображение каждой точки образца будет влиять дифракция или рассеяние света от соседних точек; лазерный сканирующий конфокальный микроскоп использует лазерный луч, проходящий через освещающее точечное отверстие, для формирования точечного источника света на образце в фокальной плоскости сканирования каждой точки образца, образец облучается, при обнаружении точечного отверстия при визуализации , путем обнаружения точечного отверстия после фотоумножителя (ФЭУ) или устройства холодной электросвязи (cCCD) поточечно, поточечно или поточечно, интенсивность света измеряется фотометром. cCCD) принимает поточечно или построчно и быстро формирует флуоресцентное изображение на экране монитора компьютера. Отверстие для освещения и отверстие для обнаружения относительно фокальной плоскости объектива сопряжены, точка на фокальной плоскости одновременно фокусируется на точечном отверстии для освещения и излучающем отверстии, точка вне фокальной плоскости не будет находиться в точечном отверстии для обнаружения при визуализация, так что конфокальное изображение представляет собой образец оптического сечения, преодолевая недостатки размытых изображений обычных микроскопов.
3. Области применения: медицина, исследования животных и растений, биохимия, бактериология, клеточная биология, эмбриология тканей, пищевая наука, генетика, фармакология, физиология, оптика, патология, ботаника, нейробиология, морская биология, материаловедение, электроника, механика, нефтяная геология, минералогия.
