Как правильно выбрать флуоресцентный микроскоп
Флуоресцентный микроскоп является стандартным микроскопическим оборудованием для визуализации в лабораториях и отделениях патологии. Он использует характеристики флуоресценции для наблюдения и визуализации. Он широко используется в клеточной биологии, нейробиологии, ботанике, микробиологии, патологии, генетике и других областях. Флуоресцентная визуализация обладает преимуществами высокой чувствительности и высокой специфичности и очень подходит для наблюдения за распределением специфических белков и органелл в тканях и клетках, изучения колокализации и взаимодействия, отслеживания жизненных динамических процессов, таких как изменения концентрации ионов. , и т. д.
Выбор микроскопа
Флуоресцентные микроскопы в основном делятся на три категории: вертикальные флуоресцентные микроскопы (подходят для срезов), инвертированные флуоресцентные микроскопы (подходят для живых клеток с учетом секций), стереоскопические флуоресцентные микроскопы (подходят для более крупных образцов, таких как растения, рыбки данио (взрослые/ эмбрион), медака, органы мыши/крысы и др.).
Выбор кубов флуоресцентных фильтров
В дополнение к рассмотрению длин волн возбуждения и испускания флуоресцентных зондов при выборе блоков фильтров также необходимо учитывать наличие неспецифического возбуждения и перекрестного цвета для образцов с многоцветной маркировкой. В эксперименте постараемся подобрать для возбуждения длину волны, наиболее близкую к пику возбуждения, а диапазон приема должен включать пик излучения. Например, пик возбуждения Alexa Fluor 488 составляет 500 нм, и в флуоресцентном микроскопе можно выбрать фильтр возбуждения 480/40. Кубы флуоресцентных фильтров, обычно используемые в флуоресцентных микроскопах, можно разделить на два типа: длиннопроходные (сокращенно LP) и полосовые (сокращенно BP), которые также необходимо выбирать в соответствии с потребностями.
Выбор люминесцентного источника света
В настоящее время широко используемые люминесцентные источники света включают ртутные лампы, металлогалогенные лампы и светодиодные источники света, которые быстро развиваются в последние годы. Спектр флуоресцентного источника света бывает непрерывным и прерывистым, а энергия будет разной в разных диапазонах. Благодаря относительно узкому спектральному диапазону, более стабильной выходной мощности, длительному сроку службы, безопасности и защите окружающей среды, а также многим другим преимуществам, светодиодный источник света постепенно становится основным источником света флуоресцентного микроскопа.
конфокальный микроскоп
При наблюдении с помощью традиционного флуоресцентного микроскопа из-за наложения флуоресцентных маркерных веществ и автофлуоресцентных структур они тесно сочетаются друг с другом, в то время как линза объектива традиционного эпифлуоресцентного микроскопа не только собирает свет из фокальной плоскости, но также собирает рассеянный свет выше и ниже фокальной плоскости. фокальной плоскости, что приводит к значительному снижению разрешения и контрастности изображения.
Конфокальная визуализация решает эту проблему, обнаруживая только часть света, отраженного от фокальной плоскости. Источник света проходит через точечное отверстие, образуя маленькое и тонкое световое пятно в фокальной плоскости. Свет, излучаемый из фокальной плоскости, собирается линзой объектива. Большая часть флуоресценции, испускаемой из точки выше или ниже фокальной плоскости объектива, не может сойтись в маленьком отверстии. Через отверстие может проходить только флуоресценция, находящаяся в фокальной плоскости, и небольшая часть флуоресценции вне фокуса, в то время как световые лучи вне фокальной плоскости сходятся спереди или сзади пластины с отверстием и блокируются от попадания в детектор через отверстие. Обнаруженное изображение представляет собой изображение из фокальной плоскости, поэтому качество конечного изображения значительно улучшается.
Благодаря преимуществам и практичности функций лазерного сканирующего конфокального микроскопа конфокальный микроскоп является незаменимым экспериментальным помощником в области высокоточной клеточной биологии, ботаники и клеточных исследований. В то же время в будущем научно-исследовательском центре это будет самый основной и основной инструмент научных исследований.
