Улучшенные преимущества лазерного сканирующего многофотонного микроскопа
Лазерный сканирующий многофотонный микроскоп является важным усовершенствованием оптического микроскопа, которое в основном показывает, что он может наблюдать глубокую структуру живых клеток, фиксированных клеток и тканей, а также может получать четкую и резкую многослойную структуру Z-плоскости, то есть оптические срезы. , который можно использовать для построения трехмерной твердотельной структуры образцов. В конфокальном микроскопе используется источник лазерного света, который после расширения заполняет всю заднюю фокальную плоскость объектива, а затем проходит через систему линз объектива, сходясь в очень маленькие точки на фокальной плоскости образца. В соответствии с числовой апертурой объектива диаметр самой яркой точки освещения составляет около 0,25 ~ 0,8 мкм, а глубина — около 0,5 ~ 1,5 мкм. .. Размер фокуса сополимеризации зависит от конструкции микроскопа, длины волны лазера, характеристик объектива, настройки состояния сканирующего устройства и свойств образца. Диапазон освещения и глубина резкости микроскопа очень велики, при этом освещение конфокального микроскопа сосредоточено * * в фокусе фокальной плоскости. Самым основным преимуществом конфокального микроскопа является то, что он может делать тонкие оптические срезы толстых флуоресцентных образцов (которые могут достигать 50 мкм и более), а толщина срезов составляет от 0,5 до 1,5 мкм. Серию изображений оптических срезов можно получить, перемещая образец вверх и вниз с помощью шагового двигателя микроскопа по оси Z. Получение информации об изображении контролируется в первой плоскости и не будет нарушено сигналами из других мест на образце. После устранения влияния фоновой флуоресценции и увеличения отношения сигнал/шум контрастность и разрешение конфокального изображения явно улучшаются по сравнению с традиционным флуоресцентным изображением при полевом освещении. Во многих образцах многие сложные структурные компоненты переплетаются, образуя сложную систему, но как только будет собрано достаточное количество оптических срезов, мы сможем реконструировать их в трех измерениях с помощью программного обеспечения. Этот экспериментальный метод широко использовался в биологических исследованиях для выяснения сложных структурных и функциональных взаимоотношений между клетками и тканями.
