Измерение количества микробов – прямой микроскопический метод подсчета!
Рост бактериальных популяций характеризуется увеличением числа клеток или увеличением клеточного материала. Существует несколько методов измерения количества клеток, включая прямой микроскопический подсчет, подсчет на чашках, турбометрию с помощью спектрофотометра, наиболее вероятное число MPN и мембранную фильтрацию. Методы измерения клеточных веществ включают измерение сухой массы клеток, измерение содержания некоторых компонентов клеток, таких как азот, РНК и ДНК, а также измерение продуктов метаболизма. Таким образом, существует множество методов измерения микробного роста, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки, и выбор должен основываться на конкретных требованиях в работе. Этот эксперимент в основном знакомит с широко используемым методом прямого счета микроскопа в производственной и научно-исследовательской работе.
Целевые требования
1. Разъяснить принцип использования для подсчета клеток крови доски для подсчета клеток.
2. Освоить метод использования доски для подсчета клеток крови для подсчета микробов.
2. Основные принципы
Микроскопический метод прямого подсчета — это простой, быстрый и интуитивно понятный метод прямого подсчета небольшого количества суспензии образца под микроскопом путем помещения его на специальное предметное стекло определенной площади и объема (также известное как бактериальный счетчик). В настоящее время широко используемые устройства для подсчета бактерий в стране и за рубежом включают планшеты для подсчета клеток крови, устройства для подсчета бактерий Peteroff Hauser и устройства для подсчета бактерий Hawksley, все из которых могут использоваться для подсчета суспензий дрожжей, бактерий, грибковых спор и т. д. с тем же основным принципом. Последние два типа бактериальных счетчиков имеют общий объем {{0}},02 мм3 после закрытия покровным стеклом, а расстояние между покровным стеклом и предметным стеклом составляет всего 0,02 мм. Таким образом, объектив с масляной иммерсией можно использовать для наблюдения и подсчета более мелких клеток, таких как бактерии. Помимо использования этих счетчиков бактерий, существует также метод оценки непосредственного наблюдения за соотношением площади мазка к площади поля под микроскопом, который обычно используется для бактериологического исследования молока. Преимущества прямого подсчета с помощью микроскопа интуитивно понятны, быстры и просты в использовании. Но недостатком этого метода является то, что измеренные результаты обычно представляют собой сумму мертвых и живых клеток. В настоящее время существуют некоторые методы, которые могут преодолеть этот недостаток, такие как сочетание камерной культуры окрашивания живых клеток (короткое время) и добавление ингибиторов деления клеток для достижения цели подсчета только живых клеток.
Использование доски для подсчета клеток крови в качестве примера для прямого подсчета клеток под микроскопом. Способы использования двух других счетчиков бактерий можно найти в руководствах различных производителей. Прямой подсчет под микроскопом с использованием пластинки для подсчета клеток крови является широко используемым методом подсчета микробов. Счетная доска представляет собой специально изготовленное предметное стекло с четырьмя бороздками, образующими на нем три площадки; Более широкая платформа посередине разделена на две половины коротким горизонтальным желобом, с каждой стороны платформы имеется сетка. Каждая сетка разделена на девять больших сеток, а большая сетка посередине представляет собой счетную комнату. Структура пластины для подсчета клеток крови показана на рисунке l{{0}}. Масштаб счетной комнаты обычно имеет две характеристики. Во-первых, большой квадрат делится на 25 средних квадратов, а каждый квадрат делится еще на 16 маленьких квадратов (рис. 15-2); Другой метод — разделить большой квадрат на 16 средних квадратов, а каждый квадрат разделить еще на 25 маленьких квадратов. Однако независимо от размера счетной доски в каждом большом квадрате содержится 400 маленьких квадратов. Если длина стороны каждого квадрата равна 1 мм, площадь каждого большого квадрата равна 1 мм2. После закрытия покровным стеклом высота между покровным стеклом и предметным стеклом составляет 0,1 мм, следовательно, объем счетной комнаты составляет 0,1 мм3 (одна тысячная миллилитра). Рисунок 15-1 Структура платы для подсчета клеток крови (I) Рисунок 15-2 Структура платы для подсчета клеток крови (II) Вид спереди; Б. Вертикальный разрез; Увеличенная сетка имеет большой квадрат посередине, обозначающий комнату для подсчета 1. Доска для подсчета клеток крови; 2. Защитное стекло; При подсчете в счетном помещении общее количество бактерий обычно подсчитывают для пяти квадратов, затем получают среднее значение каждого квадрата, умноженное на 25 или 16, чтобы получить общее количество бактерий в большом квадрате, которое затем преобразуют в общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора. Предполагая, что общее количество бактерий в пяти квадратных сетках равно A, а коэффициент разведения бактериального раствора равен B. Если в квадратной сетке 25 счетных чашек, общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора равно A/5 × 25 × 104. × B=50000A · B. Аналогично, если в квадратной сетке 16 счетных пластинок, общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора равно A/5 × 16 × 104 × B=32000A · Б
