Микробиологический микроскоп прямого счета
Экспериментальный принцип
Прямой подсчет под микроскопом с использованием гемоцитометра является широко используемым методом микробного подсчета. Преимущество этого метода в том, что он интуитивно понятен и быстр. Поместите надлежащим образом разбавленную бактериальную суспензию (или суспензию спор) в счетную камеру между предметным стеклом и покровным стеклом гемоцитометра и проведите подсчет под микроскопом. Поскольку объем счетной камеры фиксирован (0,1 мм2), его можно преобразовать в общее количество микроорганизмов в единице объема в соответствии с количеством микроорганизмов, наблюдаемых под микроскопом. Поскольку этот метод подсчитывает сумму живых и мертвых бактерий, его также называют методом общего подсчета бактерий.
Гемоцитометр обычно представляет собой специальное предметное стекло, на котором четыре бороздки образуют три площадки. Платформа посередине разделена на две половины коротким горизонтальным желобком. Сетка выгравирована на платформе с каждой стороны. Каждая сетка разделена на девять больших квадратов. Большой квадрат посередине — это счетная комната. Микроорганизмы подсчитывают в счетной камере.
Шкала счетной комнаты обычно имеет две характеристики: первая состоит в том, что большой квадрат делится на 16 средних квадратов, а каждый средний квадрат делится на 25 маленьких квадратов (рис. Ⅷ-2); другой - большой квадрат. Квадрат разделен на 25 средних квадратов, а каждый средний квадрат разделен на 16 маленьких квадратов (рис. Ⅷ-1, C). Но какая бы ни была счетная доска, количество маленьких квадратов в каждом большом квадрате одинаково, то есть 16×25=400 маленьких квадратов.
Длина стороны каждого большого квадрата равна 1 мм, а площадь каждого большого квадрата равна 1 мм2. После закрытия покровного стекла высота между предметным стеклом и покровным стеклом составляет 0,1 мм, поэтому объем счетной камеры составляет 0,1 мм3.
При подсчете обычно подсчитывают общее количество бактерий в пяти средних квадратах, затем получают среднее значение каждого среднего квадрата, а затем умножают на 16 или 25, чтобы получить общее количество бактерий в большом квадрате, а затем преобразуют в общее количество бактерий в 1 мл бактериального раствора.
Лабораторное оборудование
гемоцитометр, микроскоп, покровное стекло, стерильный капилляр;
Экспериментальные материалы
Saccharomyces cerevisiae суспензия
Методика эксперимента (метод прямого подсчета с помощью микробного микроскопа)
1. разбавление
Правильно разбавьте суспензию Saccharomyces cerevisiae. Если бактериальный раствор не густой, его не нужно разбавлять.
2. Счетная комната для микроскопии
Перед добавлением образцов выполните микроскопический осмотр счетной камеры счетной пластины. Если есть грязь, ее нужно очистить перед подсчетом.
3. добавить образец
Накройте чистую и сухую пластину гемоцитометра покровным стеклом, а затем с помощью стерильной пипетки с узким горлышком капните небольшую каплю разведенного раствора Saccharomyces cerevisiae с края покровного стекла (не слишком много), чтобы раствор бактерий находится близко к щели вдоль щели. Капиллярный осмос входит в счетную камеру сам по себе, а общая счетная камера может быть заполнена бактериальной жидкостью. Будьте осторожны, чтобы не было пузырьков воздуха.
4. подсчет микроскопа
После отдыха в течение 5 минут поместите гемоцитометр на предметный столик микроскопа, сначала используйте объектив с низким увеличением, чтобы найти расположение счетной камеры, а затем переключитесь на объектив с высоким увеличением для подсчета. Если перед подсчетом обнаруживается, что бактериальный раствор слишком густой или слишком жидкий, необходимо повторно отрегулировать разведение перед подсчетом. Для общего разбавления образца требуется около
Ячейки 5-10 подходят. Каждая счетная камера выбирает бактерии в 5 средних сетках (опционально 4 угловых и центральных сетках) для подсчета. Бактерии на линии сетки обычно учитываются только на верхней и правой линиях. При почковании дрожжей, когда размер тела почки достигает половины материнской клетки, подсчитывают две бактерии. Подсчитайте образец, чтобы рассчитать содержание бактерий в образце на основе значений, подсчитанных в двух счетных камерах.
5. Очистка гемоцитометра
После использования сполосните пластину для подсчета клеток крови под краном струями воды, не мойте ее твердыми предметами, а после мытья высушите самостоятельно или феном. При микроскопическом исследовании наблюдают, есть ли в каждой клетке остаточные бактерии или другие отложения. Если он не чистый, его необходимо мыть несколько раз, пока он не станет чистым.
