Класс микроскопической визуализации 丨 Флуоресцентный микроскоп с широким полем зрения
В приложениях для визуализации живых клеток широкопольная флуоресцентная микроскопия облегчает наблюдение за динамикой прикрепленных клеток, выращенных в определенных камерах окружающей среды, размещенных на предметном столике микроскопа. В самой базовой конфигурации стандартный перевернутый микроскоп для тканевых культур, оснащенный флуоресцентным освещением EPI, соединен с системой матричных детекторов (обычно ПЗС-камерой), соответствующими флуоресцентными фильтрами и системой затвора для ограничения чрезмерного воздействия на клетки вредного возбуждающего света. . Базовая флуоресцентная микроскопия основана на тщательно подобранных интерференционных фильтрах для выбора определенных полос пропускания для освещения и обнаружения излучаемого света. Источники света включают ртутные, ксеноновые и металлогалогенные дуговые лампы, лазерные системы с расширением луча и светоизлучающие диоды (СИД), все из которых требуют различных характеристик фильтров. Синтетические флуорофоры, используемые во флуоресцентной микроскопии, имеют спектры излучения, охватывающие ближнюю ультрафиолетовую, видимую и ближнюю инфракрасную области. Использование генетически кодируемых флуоресцентных белков значительно расширило возможности флуоресцентной микроскопии при визуализации живых клеток, позволяя исследователям точно нацеливаться на интересующие субклеточные области.
Nuohai LS 18, новый тип светового листового микроскопа, независимо разработанный Nuohai, специально разработан для трехмерного изображения с высоким разрешением прозрачных образцов больших тканей и предназначен для исследования различных интактных тканей, таких как мозг, селезенка, тонкий кишечник. , почка, легкое, сердце и опухоль. 3D точная структура органов.
При широкопольной флуоресценции излучение с полной апертурой, собираемое объективом микроскопа, максимизирует регистрируемый сигнал при минимизации необходимого времени экспозиции. Таким образом, образцы могут быть отображены с очень коротким световым периодом. Основным недостатком широкопольной визуализации является то, что флуоресценция из областей, удаленных от фокальной плоскости, а также фоновый сигнал представляют собой нежелательный свет, который часто скрывает интересующие детали. Таким образом, широкопольная визуализация дает наилучшие результаты, когда интересующие объекты являются крупными (например, органеллами) или сильно точечными по своей природе. Широкий спектр образцов живых клеток, включая прикрепленные клетки, бактерии, дрожжи и очень тонкие срезы тканей, являются идеальными кандидатами для широкопольной флуоресцентной визуализации, однако более толстые ткани (более 5 микрон) лучше всего использовать с более продвинутым методом визуализации.
Хотя в флуоресцентной визуализации было достигнуто много достижений с помощью синтетических флуоресцентных красителей, квантовых точек и флуоресцентных белков, в некоторых случаях полезно комбинировать флуоресценцию с другими методами визуализации. Например, ДИК можно использовать в сочетании с широкопольной флуоресценцией для мониторинга жизнеспособности клеток и общей морфологии при изучении представляющих интерес явлений для конкретных меченых мишеней. Получение ДИК и флуоресценции на одном изображении обычно нецелесообразно, но в правильно сконфигурированном микроскопе эти два метода можно использовать последовательно. Таким образом, после визуализации в режиме эпифлуоресценции изображения ДИК могут быть получены из флуоресцентно меченных образцов с использованием проходящего света. Два изображения могут быть объединены во время постанализа. Одновременное получение изображений ДИК и флуоресценции возможно в продвинутых конфигурациях широкопольных микроскопов с использованием спектрально разделенного освещения (например, видимого и ближнего инфракрасного) и адаптеров для двух камер или камер с разделенным обзором. В большинстве лазерных сканирующих конфокальных микроскопов изображения можно получать одновременно как в режиме флуоресценции, так и в режиме ДИК, что устраняет необходимость обработки после получения изображения. Фазовый контраст и модуляционный контраст Хоффмана также можно использовать в сочетании с широкопольной флуоресцентной микроскопией. Однако в этих методах линза объектива является специальной, будь то фазовое кольцо или модуляционная пластина Хоффмана, это приведет к потере интенсивности излучения на 5-15 процентов.
Ссылка на статью: Сеть приборного оборудования https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
