Требования к толщине оптического микроскопа для предметных стекол
Микроскопическая дегидратация и прикрепление образца: из-за многократного центрифугирования клетки теряются, поэтому лучше всего прикреплять клетки к поверхности предметного стекла или пластикового листа для оптической микроскопии, чтобы клетки были обезвожены и высушены вместе со стеклом. слайд или пластиковый лист. Требования к толщине предметных стекол в оптической микроскопии Для того чтобы клетки могли прикрепляться к предметным стеклам или пластиковым листам, необходимо предварительно наложить на предметные стекла или пластиковые листы слой пленки. Способ укладки пленки следующий:
(1) Простейшим методом оптической микроскопии является наложение тонкого слоя поливинилформальной (формваровой) пленки. Замочите очищенные предметные стекла в (0.5-1) процентном растворе поливинилформаль-хлороформа. После испарения атмосферы на предметных стеклах появляется белая пленка. Встряхните слайды несколько раз в хлороформе, чтобы изменить пленку. Тонкий и готовый к использованию.
(2) Нанесите поли-L-лизин 0.1 широты (во время приготовления растворите 1 мг полилизина в 1 мл фильтрованной воды) на очищенное предметное стекло и поместите его в контейнер для хранения при температуре 45°C после того, как капля развернется. . сухой. Этот метод лучше всего, потому что поли-L-лизин заряжен положительно, что позволяет прикрепить больше поверхностных отрицательно заряженных клеток.
(3) Добавить плазму и глицерин в дистиллированную воду в соотношении (30--40) процентов и (3-5) процентов в соответствии с требованиями оптического микроскопа к толщине предметного стекла для образования глицеринового белка. решение. Жидкость наносят на очищенное предметное стекло, разворачивают и сушат под оптическим микроскопом. Уложенную белковую пленку погружают в 2-процентный глутаровый альдегид для фиксации белка, промывают и сушат для последующего использования. Перед применением плазму капают на белковую пленку. Сделайте ее «активированной», через 30 минут промойте буфером, и ее можно будет наносить непосредственно.
Фиксированные и очищенные клетки превращают в подходящую концентрацию клеточной суспензии с фильтрованной водой под цифровым микроскопом, а оптический микроскоп помещают на предметное стекло или пластиковый лист, покрытый мембраной, и помещают во влажное слабое место. температуре (40C) окружающей среды (30-120) минут, чтобы позволить клеткам прикрепиться к мембране. Используйте тонкий пинцет, чтобы взять предметное стекло и встряхнуть его в чистой бидистиллированной воде и смыть неприкрепленные клетки с помощью оптического микроскопа. Требования к толщине предметных стекол в оптических микроскопах Затем поляризационные микроскопы быстро помещают в сосуд, наполненный 50-процентным ацетоном (или этанолом). Процесс обезвоживания заключается в помещении предметных стекол в ацетон или этанол с возрастающей концентрацией каждые 3 минуты и под оптическим микроскопом или в непрерывном увеличении концентрации дегидратирующего агента в контейнере для предметных стекол. По лабораторному опыту автора последняя операция более удобна. Специфический метод оптической микроскопии позволяет отсасывать половину дегидратирующего агента из контейнера каждые 3 минуты, а затем добавлять равное количество дегидратирующего агента с концентрацией 100 процентов. После 5-6 операций концентрация дегидратирующего агента в сосуде микроскопа достигает более 0,5%, и клетки успешно обезвоживаются. После высыхания в критической точке предметное стекло или пластиковый лист приклеивают к опоре для образцов проводящим клеем для металлического покрытия. Имеются также удобства для прикрепления клеток к мембранам, закладываемым третьим способом. Оптический микроскоп позволяет подвешивать клетки, фиксированные низкой концентрацией глутарового альдегида, на «активированную» белковую пленку. Для оптического микроскопа требуется, чтобы предметное стекло помещалось на 10 минут по толщине, а предметное стекло или пластиковый лист пропитывали 2-процентным глутаральдегидом. Через 30 минут промыть отфильтрованной бидистиллированной водой, а затем обезвожить, высушить и покрыть металлом согласно вышеизложенному методу.
