Подготовка и наблюдение биологических образцов для электронной микроскопии
Разрешение микроскопа зависит от длины волны используемого света, электронный микроскоп начал появляться в 1933 году из-за использования гораздо более короткой длины волны, чем видимый свет, электронного луча в качестве источника света, так что разрешение можно достичь, чем значительно усовершенствован оптический микроскоп. Другой источник света также определяет ряд различий между электронным и оптическим микроскопом.
В соответствии с различиями в принципе визуализации электронного луча и роли образца в разных способах современный электронный микроскоп был разработан в несколько типов, в настоящее время * обычно используются просвечивающий электронный микроскоп и сканирующий электронный микроскоп. микроскопа, первое может находиться в диапазоне 1,000-1,000,000 раз общего увеличения диапазона изменений, второе может находиться в диапазоне общего увеличения { {4}},000 раз превышает общее увеличение изменений между ними. Этот эксперимент направлен на подготовку образцов для двух типов микроскопов: просвечивающего электронного микроскопа и сканирующего электронного микроскопа.
Материалы
1. Штамм кишечной палочки (кишечная палочка, кишечная палочка) скошенный.
2. Растворы или реагенты Амилацетат, концентрированная серная кислота, безводный этанол, стерильная вода, 2% натрий фосфорновольфрамовая кислота (pH 6.5-8.0) водный раствор, 0.3% раствор поливинилформальдегида (растворенный в трихлорметане), цитохром с, ацетат аммония, плазмида pBR322.
3. Инструменты или другие принадлежности Обычный оптический микроскоп, медная сетка, фарфоровая воронка, стакан, плоская чашка, стерильная бюретка, стерильный пинцет, ланцет, предметные стекла, ** счетная пластина, вакуумная установка для нанесения покрытий, сушилка критической точки и т. д.
Этапы работы
(I) Подготовка проб и наблюдение с помощью трансмиссионной электронной микроскопии
1. Обработка металлической сетки
Образцы для оптической микроскопии помещают на предметные стекла для наблюдения. Однако в просвечивающей электронной микроскопии, поскольку электроны не могут проникнуть через лист стекла, в качестве носителя можно использовать только сетчатый материал, обычно называемый несущей сеткой. Несущую сетку можно разделить на множество различных спецификаций в зависимости от различных материалов и форм, * из которых обычно используется медная сетка 200-400 (количество отверстий). Медную сетку следует обработать перед использованием, чтобы удалить с нее грязь и сохранить ее в чистоте, в противном случае это повлияет на качество поддерживающей пленки и четкость фотографий образцов. В этом эксперименте используется медная сетка размером 400 меш, которую можно обработать следующим образом: сначала отбелить ее амилацетатом в течение нескольких часов, затем несколько раз промыть дистиллированной водой, а затем отбелить в безводном этаноле для обезвоживание. Если медная сетка, полученная указанным выше методом, все еще не очищена, можно использовать разбавленную концентрированную серную кислоту (1:1), погрузив ее на 1 ~ 2 минуты, или в 1% раствор NaOH, кипяченный в течение нескольких минут, прополоскав несколько раз дистиллированной водой. , помещенный в систему обезвоживания безводного этанола для использования.
2. Подготовка вспомогательного фильма
При наблюдении образца несущая сеть также должна быть покрыта слоем неструктурированной однородной пленки, в противном случае небольшие образцы будут вытекать из отверстий в несущей сети, этот слой пленки обычно называют опорной пленкой или несущей пленкой. Поддерживающая пленка должна быть прозрачной для электронов, а ее толщина обычно должна быть менее 20 нм; под воздействием электронного луча пленка также должна обладать определенной степенью механической прочности, сохранять стабильность структуры и обладать хорошей теплопроводностью; кроме того, опорная сетка не должна иметь видимой структуры под электронным микроскопом, не вступать в химическую реакцию с переносимым образцом и не мешать наблюдению за образцом, а ее толщина обычно составляет около 15 нм. Поддерживающая пленка может быть изготовлена из пластиковой пленки (например, огнестойкой хлопчатобумажной пленки, полиэтиленформальдегидной пленки и т. д.), углеродной пленки или металлической пленки (например, бериллиевой пленки и т. д.). В обычных условиях работы требования могут быть выполнены с помощью пластиковой пленки, в то время как подготовка пластиковой пленки в огнестойкой хлопковой клейкой пленке относительно проста, но ее прочность не такая высокая, как у полиэтиленформальдегидной пленки.
