Требования к приготовлению предметных стекол для флуоресцентного микроскопа
(1) Стеклянное предметное стекло
Толщина слайда должна составлять от 0,8 до 1,2 мм. Если предметное стекло слишком толстое, оно, с одной стороны, будет поглощать больше света, а с другой стороны, не позволит свету возбуждения собраться на образце. Предметное стекло должно быть гладким, однородным по толщине и не иметь явной спонтанной флуоресценции. Иногда необходимы предметные стекла из кварцевого стекла.
(2) Покровное предметное стекло
Толщина покровного стекла составляет около 0,17 мм, оно гладкое. Для усиления возбуждающего света также можно использовать интерференционное покровное стекло. Это специально разработанное покровное стекло с несколькими слоями веществ (например, фторида магния), которые оказывают различное интерференционное воздействие на свет разной длины волны. Это может обеспечить плавное прохождение флуоресценции, в то время как отраженный свет возбуждения может возбудить образец.
(3) Образец
Срезы тканей или другие образцы не должны быть слишком толстыми. Если они слишком толстые, большая часть возбуждающего света поглощается в нижней части образца, тогда как верхняя часть, наблюдаемая непосредственно объективом, возбуждается не полностью. Кроме того, перекрытие ячеек или маскировка примесей могут повлиять на оценку.
(4) Герметик
В качестве монтажного агента обычно используют глицерин, который не должен иметь спонтанной флуоресценции, бесцветен и прозрачен. Яркость флуоресценции относительно яркая при pH 8.5-9.5, и ее нелегко быстро исчезнуть. Поэтому в качестве герметизирующего агента обычно используется равная смесь глицерина и карбонатного буфера 0,5 моль/л с pH 9,0-9,5.
(5) Зеркальное масло
При использовании темнопольного флуоресцентного микроскопа и масляного микроскопа для наблюдения за образцами необходимо использовать зеркальное масло. Можно использовать специальное нефлуоресцентное масло для зеркал или вместо него можно использовать глицерин. Также можно использовать жидкий парафин, но показатель преломления низкий и незначительно влияет на качество изображения.
