Требования к подготовке рутинных образцов для микроскопии
Конфокальный микроскоп — это эпохальный высокотехнологичный продукт, разработанный в 1980-х годах, и сегодня он является одним из важных аналитических инструментов в молекулярной биологии и науках о жизни. Конфокальная микроскопия основана на визуализации флуоресцентного микроскопа с добавлением лазерного сканирующего устройства с использованием компьютера для обработки изображений для получения флуоресцентных изображений микроструктуры внутри клеток или тканей и наблюдения за изменениями в морфологии многих физиологических сигнальных машин на субклеточном уровне. Станьте мощным исследовательским инструментом в области морфологии, молекулярной клеточной биологии, неврологии, фармакологии, генетики и других научных областей.
Подготовка образца для конфокальной микроскопии является важным этапом перед обнаружением. Образцы необходимо пометить флуоресцентными зондами (одинарными, двойными, тройными).
в
Образцы могут представлять собой фиксированные или живые ткани, либо фиксированные или живые прилипшие культуры. Клетки следует культивировать на специальных маленьких культуральных чашках Confocal или на покровных стеклах. Подвесьте клетки, встряхните или бросьте срезы и накройте пленкой для покровных стекол. Толщина Zda образца составляет около 1–2 мм, толщина используемого покровного стекла должна быть менее 0,17 мм, а толщина предметного стекла должна быть в пределах 0,8–1,2. мм, поверхность гладкая, толщина однородная, нет явной интерференционной флуоресценции. Среда для заливки часто используется для фиксированных образцов, а для заливки обычно используется глицерин, приготовленный в PBS с pH 8.5-9.
Стандартные требования к подготовке проб:
1. Подбор красителей
Поскольку в конфокальном микроскопе в качестве источника света используется одноволновой лазер, выбор флуоресцентных красителей должен основываться на длине волны лазера, оснащенного конфокальным микроскопом. Если в одном и том же образце содержится несколько флуоресцентных красителей, длина волны их излучения также должна учитываться, насколько это возможно. Не перекрывайте друг друга, чтобы избежать проблем с перекрестным цветом.
2. Выбор носителя образца
Как правило, высокомощный объектив конфокального микроскопа представляет собой масляную линзу, его числовая апертура мала, а рабочее расстояние между объективом и образцом должно быть не более 0,17 мм. Слайды и покровные стекла в порядке. Если это взвешенные клетки или взвешенные частицы, чашку Петри, предназначенную для конфокального микроскопа, можно использовать для переноса образца для наблюдения.
3. Выбор монтажной среды
Если образец необходимо наблюдать только один раз, а флуоресценция не гасится легко, вы можете выбрать определенную концентрацию смеси глицерина, чтобы запечатать предметное стекло. Если образец необходимо поместить на определенный период времени и взять несколько раз, следует выбрать монтажную среду, препятствующую гашению флуоресценции, чтобы уменьшить потерю флуоресцентных сигналов.
