Требования к изготовлению препаратов для флуоресцентного микроскопа
（1） Стеклянное предметное стекло
Толщина слайда должна составлять от 0,8 до 1,2 мм. Если предметное стекло слишком толстое, оно, с одной стороны, поглощает больше света, а с другой стороны, не может привести к скоплению возбуждающего света на образце. Предметное стекло должно быть гладким, однородным по толщине и без явной спонтанной флуоресценции. Иногда необходимы предметные стекла из кварцевого стекла.
（2） Покровное предметное стекло
Толщина покровного стекла составляет около 0,17 мм, оно гладкое и чистое. Для усиления возбуждения можно также использовать интерференционное покровное стекло. Это специально разработанное покровное стекло с несколькими слоями веществ (например, фторида магния), оказывающих различное интерференционное воздействие на разных длинах волн света. Это может обеспечить плавное прохождение флуоресценции, в то время как отраженное возбуждение может возбудить образец.
（3） Образец
Срезы тканей или другие образцы не должны быть слишком толстыми, так как возбуждающий свет в основном поглощается в нижней части образца, в то время как верхняя часть, наблюдаемая непосредственно через объектив, возбуждается не полностью. Кроме того, перекрытие ячеек или маскировка примесей могут повлиять на оценку.
（4） Герметик
В качестве монтажного агента обычно используется глицерин, он не должен иметь спонтанной флуоресценции, бесцветен и прозрачен. Яркость флуоресценции ярче при pH 8,5–9,5, и ее нелегко быстро исчезнуть. Поэтому в качестве герметика обычно используется равная смесь глицерина и 0,5моль/л карбонатного буфера с pH 9,0-9,5.
（5） Зеркальное масло
При наблюдении образцов с помощью темнопольного флуоресцентного микроскопа и масляного микроскопа необходимо использовать масло для линз. Лучше всего использовать специально изготовленное нефлуоресцентное масло для линз, которое также можно заменить глицерином, как упоминалось выше. Можно также использовать жидкий парафин, но показатель преломления низкий и незначительно влияет на качество изображения.
Меры предосторожности при использовании флуоресцентного микроскопа
(1) Строго следуйте требованиям заводского руководства к флуоресцентному микроскопу и не меняйте программу произвольно.
(2) Проверка должна проводиться в темном помещении. Войдя в темную комнату, подключите источник питания и зажгите ртутную лампу сверхвысокого давления на 5–15 минут. После того как источник света излучает сильный свет и стабилизируется, глаза полностью адаптируются к темной комнате, прежде чем приступить к наблюдению за образцом.
(3) Чтобы предотвратить повреждение глаз ультрафиолетом, при регулировке источника света следует носить защитные очки.
(4) Время проверки должно составлять 1-2 часов каждый раз. Если оно превышает 90 минут, то сила света ртутной лампы сверхвысокого давления постепенно снижается и люминесценция ослабевает; После воздействия ультрафиолетового излучения в течение 3-5 минут флуоресценция образца также значительно снизилась; Таким образом, оно не должно превышать 2-3 часов.
(5) Срок службы источника света флуоресцентного микроскопа ограничен, и образец следует проверять централизованно, чтобы сэкономить время и защитить источник света. В жаркую погоду следует добавить электрический вентилятор для рассеивания тепла и охлаждения. При замене новой лампочки время использования следует записывать с самого начала. Когда лампа выключается и ее нужно использовать снова, ей необходимо дождаться полного остывания лампы, прежде чем зажечь ее. Избегайте многократного зажигания источника света.
(6) Наблюдайте за образцом сразу после окрашивания, поскольку флуоресценция со временем постепенно уменьшается. Если образец хранится в полиэтиленовом пакете при температуре 4 градуса, это может задержать время затухания флуоресценции и предотвратить испарение монтажного агента.
(7) Стандарт оценки яркости флуоресценции обычно делится на четыре уровня, а именно «один» - отсутствие или видимая слабая флуоресценция. плюс - Видна только отчетливо видимая флуоресценция. плюс плюс - Видимый с яркой флуоресценцией. 'плюс-плюс-плюс' - Видимая и ослепительная флуоресценция.
