Несколько замечаний и советов по использованию фазово-контрастной микроскопии
Использование фазово-контрастной микроскопии
1) Установите фазово-контрастное устройство: снимите конденсорную линзу обычного микроскопа, и установите конденсорную линзу с кольцевой диафрагмой на согласующем микроскопе; снять обычный объектив микроскопа и заменить его объективом с фазовой пластинкой; заменить окуляры на фокусирующие окуляры для фазово-контрастных микроскопов; специальные зеленые светофильтры (иногда необязательные) ставятся на световом входе источника света.
2) Выравнивание света и фокусировка: Отрегулируйте фокусирующий окуляр и винт регулировки толщины до тех пор, пока в поле зрения не будут отчетливо видны белый круг и черный круг. Черный круг зафиксирован, а белый круг можно перемещать, регулируя винт на конденсорном устройстве так, чтобы черный круг и белый круг полностью совпадали. Снимите фокусирующий окуляр и замените его оригинальным окуляром микроскопа для проверки.
Анализ проблем использования фазово-контрастного микроскопа
1. Влияние толщины образца При фазово-контрастном наблюдении толщина образца должна быть 5 мкм или меньше. При использовании более толстого образца верхний слой образца будет очень четким, но глубокий слой будет размытым и вызовет фазовые помехи. и светорассеяние.
2. Влияние покровного стекла и предметного стекла Образец должен быть закрыт покровным стеклом, иначе светлое кольцо кольцевой диафрагмы и темное кольцо фазовой пластины трудно перекрываются. Фазово-контрастное наблюдение также предъявляет высокие требования к качеству предметного и покровного стекла. При наличии царапин, неравномерной толщины или неровности возникают яркие кольцевые искажения и фазовые помехи. Кроме того, когда предметное стекло слишком толстое или слишком тонкое, яркое кольцо кольцевой диафрагмы будет увеличиваться или уменьшаться.
3. Эффект ореола и затухания В процессе визуализации фазово-контрастного микроскопа, когда определенная структура становится темной из-за фазовой задержки, это не потеря света, а результат перераспределения света в плоскости изображения. Таким образом, свет, который явно теряется в темных областях, будет выглядеть как яркий ореол вокруг более темных объектов. Это недостаток фазово-контрастной микроскопии, который затрудняет наблюдение тонких структур, а явление гало более серьезно, когда кольцевая диафрагма очень узкая. Другим явлением в фазово-контрастной микроскопии является эффект затенения, который относится к потере контраста на краях большей области с той же фазовой задержкой при наблюдении с помощью фазового контраста.
4. Инверсия фазы. При n'n контрастность светлого и темного изображения прямо противоположна, что называется инверсией фазы. Это неузнаваемо, когда разность фаз δ=0, а контраст становится больше с увеличением δ, а инверсия фазы появится, когда δ продолжает увеличиваться до определенного значения. При использовании 90-процентного объектива с высоким коэффициентом поглощения (высокой контрастности) это значение преобразования составляет около 0,55λ, а при использовании 70-процентного стандартного коэффициента поглощения объектива - около 0,33λ. . Объективы с более высокими значениями поглощения следует использовать для разрешения меньших различий оптического пути.
