Использование стереофлуоресцентного микроскопа и меры предосторожности
Инструкции:
(1) Поместите лист материала на сцену.
(2) Включите стабилизатор напряжения флуоресцентного микроскопа. Затем нажмите группу запуска, чтобы зажечь УФ-лампу и не выключать ее в течение 15 минут, и не запускать ее снова в течение 3 минут после ее выключения.
(3) Установите фильтр возбуждения в положение v, фильтр цветоделения в положение v и выберите блокирующий фильтр 495 или 475 нм.
(4) Выберите флуоресцентный микроскоп с объективом uvFL40, uvFL100 для микроскопического исследования.
(5) Добавьте нефлуоресцентное масло на предметное стекло, сначала используйте 40-кратное, а затем 100-кратное фокусирующее микроскоп для проверки. Появляется флуоресценция.
(7) Поскольку флуоресценция люминесцентных веществ со временем постепенно ослабевает при их облучении ультрафиолетовым светом, при микроскопическом исследовании необходимо часто менять поле зрения.
(8) Микроскопы с малым увеличением uvFL10 или uvFL20 также можно использовать для осмотра материалов (при использовании маломощных линз флуоресцентное масло не добавляется).
Метод записи флуоресцентного изображения:
Изображение флуоресценции, наблюдаемое под флуоресцентным микроскопом, имеет как морфологические характеристики, так и цвет и яркость флуоресценции. При оценке результатов оба должны быть объединены для всестороннего суждения. Результаты фиксируются на основе субъективных показателей, то есть визуального наблюдения рабочих. Как общее качественное наблюдение, в основном надежное. С развитием технологий и науки объективные индикаторы используются для записи результатов суждений в той или иной степени, например, клеточные спектрофотометры, анализаторы изображений и другие инструменты. Однако результаты, зафиксированные этими инструментами, также должны сочетаться с субъективными суждениями.
Фотография с флуоресцентного микроскопа очень необходима для записи флуоресцентных изображений. Поскольку флуоресценция легко угасает и ослабевает, необходимо фиксировать результаты в режиме реального времени. Метод в основном такой же, как и при обычной микрофотографии. Просто нужно использовать высокоскоростную светочувствительную пленку, такую как ASA200 или выше или 24. выше. Поскольку ультрафиолетовый свет оказывает сильное влияние на тушение флуоресценции, например маркеры FITC, яркость флуоресценции уменьшится на 50 процентов при облучении ультрафиолетовым светом в течение 30 с. Поэтому, если скорость экспозиции слишком медленная, флуоресцентное изображение не может быть получено. Флуоресцентные микроскопы общего назначения имеют полуавтоматические или полностью автоматические устройства микрофотографической системы.
Меры предосторожности:
(1) Работайте строго в соответствии с требованиями заводских инструкций флуоресцентного микроскопа и не меняйте программу по своему желанию.
(2) Осмотр следует проводить в темной комнате. После входа в темную комнату подключите источник питания и зажгите ртутную лампу сверхвысокого давления на 5-15 минут. После того, как сильный свет от источника света стабилизируется, глаза полностью адаптируются к фотолаборатории, после чего начинают наблюдать за образцом.
(3) Во избежание повреждения глаз ультрафиолетовыми лучами при регулировке источника света следует надевать защитные очки.
(4) Время проверки предпочтительно составляет 1-2 часов каждый раз. Если оно превышает 90 минут, сила света ртутной лампы сверхвысокого давления будет постепенно снижаться, а флуоресценция ослабевать; после облучения образца ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 минут флуоресценция также будет значительно ослаблена; поэтому он не должен превышать 2-2 часов максимум. 3ч.
(5) Срок службы источника света флуоресцентного микроскопа ограничен, и образцы следует проверять коллективно, чтобы сэкономить время и защитить источник света. В жаркую погоду следует добавить вентиляторы для отвода тепла, а новые лампочки следует регистрировать с момента начала их использования. Если вы хотите использовать его снова после того, как лампа погаснет, вы должны подождать, пока лампа достаточно остынет, прежде чем зажечь ее. Не зажигайте источник света несколько раз в день.
(6) Наблюдайте за образцом сразу после окрашивания, так как флуоресценция со временем постепенно ослабевает. Если образец хранится в полиэтиленовом пластиковом пакете при температуре 4°С, время ослабления флуоресценции может быть отложено, а монтажный агент может предотвратить испарение.
(7) Стандарт оценки яркости флуоресценции: обычно он делится на четыре уровня, то есть «один» - флуоресценция отсутствует или наблюдается слабая. «плюс» — видна только четко видимая флуоресценция. «плюс плюс» — видимый и яркий
