Структура и основные компоненты флуоресцентного микроскопа
Флуоресцентная микроскопия является важным инструментом в иммунофлуоресцентной цитохимии. Он состоит из основных компонентов, таких как источник света, система фильтрующих пластин и оптическая система. Это использование определенной длины волны света для возбуждения флуоресценции образца и наблюдения за флуоресцентным изображением образца путем усиления объектива и системы окуляров.
Структура и основные компоненты флуоресцентного микроскопа
(1) Источник света
В настоящее время в качестве источников света часто используют ртутные лампы сверхвысокого давления мощностью 200 Вт. Они изготовлены из кварцевого стекла, имеют сферическую форму посередине, а внутрь залито определенное количество ртути. Во время работы разряд между двумя электродами вызывает испарение ртути, и давление воздуха в шаре быстро возрастает. Когда ртуть полностью испаряется, ее давление может достигать 50-70 стандартного атмосферного давления, и этот процесс обычно занимает около 5-15 минут. Свечение ртутной лампы сверхвысокого давления является результатом испускания квантов света при непрерывной диссоциации и восстановлении молекул ртути разрядом между электродами. Он излучает сильный ультрафиолетовый и сине-фиолетовый свет, которого достаточно для возбуждения различных флуоресцентных веществ, поэтому он широко используется в флуоресцентной микроскопии.
Ртутные лампы сверхвысокого давления также выделяют много тепла. Следовательно, корпус лампы должен иметь хорошие условия отвода тепла, а температура рабочей среды не должна быть слишком высокой.
Новая ртутная лампа сверхвысокого давления может зажигаться без высокого напряжения в начале использования. После периода использования его необходимо запустить при высоком напряжении (около 15000 В). После запуска рабочее напряжение при обслуживании обычно составляет 50-60 В, а рабочий ток составляет около 4 А. Средний срок службы ртутной лампы сверхвысокого давления мощностью 200 Вт составляет около 200 часов, если она используется в течение 2 часов каждый раз. Чем короче время работы, тем короче срок службы. Если его использовать только в течение 20 минут, срок службы сократится на 50 процентов. Поэтому минимизируйте количество пусков при его использовании. Во время использования лампы ее световая отдача постепенно снижается. После того, как свет погаснет, подождите, пока он остынет, прежде чем перезапускать. Не выключайте лампочку сразу после ее зажигания, чтобы не повредить электрод из-за неполного испарения ртути. Обычно нужно подождать 15 минут. Из-за высокого давления ртутной лампы сверхвысокого давления и сильных ультрафиолетовых лучей колба должна быть помещена в камеру лампы, прежде чем ее можно будет зажечь, чтобы не повредить глаза и не вызвать срабатывание в случае взрыва. .
Схема источника света ртутной лампы сверхвысокого давления (100 Вт или 200 Вт) и несколько частей, включая трансформатор, балласт и пуск. Имеется система регулировки светящегося центра колбы в фонаре. Сзади колбы колбы установлен алюминиевый вогнутый рефлектор, а спереди установлена светособирающая линза.
Отечественная ртутная лампа сверхвысокого давления GCQ-200 имеет хорошие характеристики и может заменить импортные лампы, такие как HBO-200. Средний срок службы составляет более 200 часов, а цена относительно низкая.
Простой и портативный бром-вольфрамовый флуоресцентный источник света с высокой цветовой температурой, разработанный в моей стране, имеет небольшой размер, легкий вес, низкую мощность, двойное использование переменного и постоянного тока (с источником питания постоянного тока), легко носить с собой, прост в использовании и имеет популяризировались и применялись.
(2) Система цветных фильтров
Система цветных фильтров является важной частью флуоресцентного микроскопа и состоит из фильтрующей пластины возбуждения и прижимной фильтрующей пластины. Модель фильтрующей пластины и название каждого производителя часто неоднородны. Фильтрующие пластины обычно называются в честь основного цвета, буквы впереди обозначают цвет, буквы сзади обозначают стекло, а числа обозначают характеристики модели. олимп микроскоп
(3) Объектив
Могут использоваться различные объективы, но используются ахроматические объективы, поскольку их автофлуоресценция минимальна, а их светопропускающие свойства (диапазон длин волн) подходят для флуоресценции. Поскольку яркость флуоресцентного изображения в поле зрения микроскопа пропорциональна квадрату светосилы объектива и обратно пропорциональна его увеличению, для повышения яркости флуоресцентного изображения используют объектив с большим следует использовать светосилу. Особенно при большом увеличении его эффект очень заметен. Поэтому для образцов с недостаточной флуоресценцией следует использовать объектив с большой светосилой и максимально малым окуляром (4×, 5×, 6,3× и т. д.).
(4) Зеркало
Отражающий слой рефлектора обычно покрыт алюминием, потому что алюминий меньше поглощает в сине-фиолетовой области ультрафиолетового света и видимого света, а отражение составляет более 90 процентов, а отражение серебра составляет всего 70 процентов. Как правило, используется плоский отражатель.
(5) Конденсатор
Конденсоры, предназначенные для флуоресцентной микроскопии, изготавливают из кварцевого стекла или другого стекла, пропускающего УФ-излучение. Есть два типа конденсаторов ясного поля и конденсаторов темного поля. Существуют также фазово-контрастные флуоресцентные концентраторы.
(6) Эписветовое устройство
Новый тип эписветового прибора заключается в том, что после того, как свет от источника света попадает на интерференционный спектроскопический фильтр, коротковолновая часть (ультрафиолетовая и пурпурно-синяя) отражается благодаря свойствам покрытия на фильтре. Когда фильтр обращен к источнику света, угол составляет 45. Когда он наклонен, он попадает в объектив вертикально и через объектив попадает в образец, так что образец возбуждается. В это время линза объектива непосредственно действует как собиратель света. В то же время длинная часть фильтра (зеленая, желтая, красная и т. д.) прозрачна для фильтра, поэтому не отражается в направлении объектива, а фильтр действует как фильтрующая пластина возбуждения, поскольку флуоресценция образца находится в длинноволновой области видимого света, может проходить через фильтр и достигать окуляра для наблюдения, яркость флуоресцентного изображения увеличивается с увеличением увеличения и сильнее, чем проходящий свет. источник с большим увеличением. В дополнение к функции источника пропускающего света он больше подходит для прямого наблюдения за непрозрачными и полупрозрачными образцами, такими как толстые срезы, фильтрующие мембраны, колонии и образцы тканевых культур. В новых флуоресцентных микроскопах, разработанных в последние годы, в основном используются эписветовые устройства, которые называются эпифлуоресцентными микроскопами.
