Технические параметры и навыки использования флуоресцентного микроскопа
Технические параметры флуоресцентного микроскопа 1. Широкоугольный окуляр 2. Ахроматическая линза объектива 3. Преобразователь объектива с четырьмя отверстиями 4. Устройство падающей флуоресценции Синяя (B) Зеленая (G) система возбуждения 10Ртутная лампа 0 Вт 5. Коаксиальная грубая Механизм микрофокусировки: диапазон фокусировки 15 мм Значение микросетки 0,002 мм 6. Двухслойный механический верстак Диапазон продольного перемещения: 70 мм Диапазон поперечного перемещения: 50 мм
Технические параметры флуоресцентного микроскопа
1. Широкоугольный окуляр
2. Ахроматический объектив
3. Преобразователь объектива с четырьмя отверстиями
4. Устройство падающей флуоресценции Синий (B) Зеленый (G) Система возбуждения Ртутная лампа 100 Вт
Коаксиальный механизм грубой микрофокусировки: диапазон фокусировки: 15 мм, значение микросетки: 0.002 мм
6. Двухслойный механический верстак
Диапазон продольных перемещений: 70 мм Диапазон боковых перемещений: 50 мм
Советы и методы использования флуоресцентной микроскопии
（1） Слайд
Толщина предметного стекла должна быть от 0,8 до 1,2 мм. Если предметное стекло слишком толстое, то, с одной стороны, оно поглощает слишком много света, а с другой стороны, оно не может вызвать скопление возбуждающего света на образце. Предметное стекло должно быть гладким и чистым, однородной толщины и без значительной спонтанной флуоресценции. Иногда необходимы предметные стекла из кварцевого стекла.
(2) Защитное стекло
Толщина покровного стекла составляет около 0,17 мм, оно гладкое и чистое. Для усиления возбуждения также можно использовать интерференционное покровное стекло. Это специальное покровное стекло, покрытое несколькими слоями веществ (например, фтористого магния), оказывающих разное интерференционное воздействие на разные длины волн света. Это может обеспечить плавное прохождение флуоресценции, отражая возбуждение, которое может возбудить образец.
(3) Образец
Срезы тканей или другие образцы не должны быть слишком толстыми. Например, если они слишком толстые, большая часть возбуждающего света поглощается нижней частью образца, в то время как верхняя часть, непосредственно наблюдаемая объективом, возбуждается недостаточно. Кроме того, на оценку может повлиять перекрытие ячеек или маскирование примесей.
(4) Монтажный агент
В качестве монтажного агента обычно используется глицерин, он не должен спонтанно флуоресцировать, быть бесцветным и прозрачным. Яркость флуоресценции ярче при pH от 8,5 до 9,5, и ее нелегко быстро исчезнуть. Поэтому в качестве монтажного агента обычно используется эквивалентная смесь глицерина и 0,5 моль/л карбонатного буферного раствора с рН от 9,0 до 9,5.
(5) Зеркальное масло
Как правило, при использовании флуоресцентного микроскопа темного поля и масляного микроскопа для наблюдения за образцами необходимо использовать масло для линз. Лучше всего использовать специальное нефлуоресцентное масло для линз, которое также можно заменить вышеупомянутым глицерином. Также можно использовать жидкий парафин, но показатель преломления у него низкий, что незначительно влияет на качество изображения.
