Разница между лазерным конфокальным микроскопом и традиционным оптическим микроскопом
Лазерная сканирующая конфокальная флуоресцентная микроскопия является относительно передовым инструментом для анализа молекулярной и клеточной биологии, в котором используются компьютер, лазер и технология обработки изображений для получения трехмерных данных биологических образцов. Он в основном используется для наблюдения за структурой живых клеток и биологических изменений конкретных молекул и ионов, количественного анализа и количественного определения в реальном времени.
Принцип лазерной конфокальной микроскопии: используйте отверстие для освещения, расположенное за источником света, и отверстие для обнаружения, расположенное перед детектором, для реализации точечного освещения и обнаружения точки. Свет, излучаемый источником света через отверстие для освещения, фокусируется на точке в фокальной плоскости образца, а испускаемая флуоресценция из этой точки отображается на отверстии для обнаружения, и любой излучаемый свет за пределами этой точки блокируется детектором. дырочка. Точечное отверстие освещения и точечное отверстие обнаружения сопряжены с облучаемой точкой или обнаруженной точкой, поэтому обнаруженная точка является конфокальной точкой, а плоскость, в которой расположена обнаруженная точка, является конфокальной плоскостью.
Компьютер отображает обнаруженные точки на экране компьютера в виде точек изображения. Чтобы создать полное изображение, система сканирования на оптическом пути сканирует фокальную плоскость образца, чтобы создать полное конфокальное изображение. Пока предметный столик перемещается вверх и вниз по оси Z, новый слой образца перемещается в конфокальную плоскость, и новый слой образца отображается на мониторе. При непрерывном движении оси Z можно получить непрерывные изображения разных слоев образца. Легкая обрезка изображения.
Разница между традиционными световыми микроскопами
У традиционных флуоресцентных микроскопов есть непреодолимый недостаток: флуоресцентные структуры вне фокальной плоскости размыты и размыты. Причина в том, что большинство биологических образцов имеют перекрывающиеся структуры. Если флуоресцентно меченные структуры распределены на разных уровнях и перекрываются, рассеянная флуоресценция сверху или снизу фокальной плоскости также принимается линзой объектива, и разрешение флуоресцентного микроскопа значительно улучшается. уменьшать.
На основе традиционных оптических микроскопов лазерные сканирующие конфокальные микроскопы используют лазерный свет в качестве источника света, принимают принцип и устройство сопряженной фокусировки и используют компьютеры для цифровой обработки изображений, наблюдения, анализа и вывода наблюдаемых объектов. Образец можно томографически сканировать и визуализировать для неразрушающего наблюдения и анализа трехмерной пространственной структуры клеток. В то же время, используя зонды для иммунофлуоресцентной маркировки и ионно-флуоресцентной маркировки, эта технология может не только наблюдать за фиксированными клетками и срезами тканей, но также выполнять динамическое наблюдение и обнаружение структуры, молекул, ионов и жизнедеятельности живых клеток в режиме реального времени. на субклеточном уровне Наблюдение за физиологическими сигналами, такими как Ca2 plus , значение pH, мембранный потенциал и изменения в клеточной морфологии, стало новым поколением мощных инструментов исследования в области морфологии, молекулярной клеточной биологии, неврологии, фармакологии и генетики.
