Использование флуоресцентной микроскопии: методы и навыки
Технические параметры флуоресцентного микроскопа 1. Широкоугольный окуляр 2. Ахроматическая линза объектива 3. Преобразователь объектива с четырьмя отверстиями 4. Эпифлуоресцентное устройство Синяя (B) Зеленая (G) система возбуждения 10Ртутная лампа 0 Вт 5. Коаксиальный механизм грубой и точной фокусировки: регулировка Диапазон фокусировки: 15 мм Размер сетки микродвижений: 0,002 мм 6. Двухслойный механический стол Диапазон продольного перемещения: 70 мм Диапазон бокового перемещения: 50 мм
Используйте метод навыков
(1) Предметное стекло
Толщина предметного стекла должна быть от 0,8 до 1,2 мм. Слишком толстое предметное стекло, с одной стороны, поглощает больше света, а с другой стороны, возбуждающий свет не может сконцентрироваться на образце. Слайды должны быть гладкими, однородными по толщине и не иметь явно выраженной аутофлуоресценции. Иногда используются предметные стекла из кварцевого стекла.
(2) Защитное стекло
Толщина покровного стекла составляет около 0,17 мм, гладкое. Для усиления возбуждающего света также можно использовать интерференционное покровное стекло, которое представляет собой специальное покровное стекло, покрытое несколькими слоями веществ (таких как фторид магния), оказывающих различное интерференционное воздействие на свет с разными длинами волн, что может сделать флуоресценция проходит гладко. Возбуждающий свет проходит и отражается, и этот отраженный возбуждающий свет возбуждает образец.
(3) Образец
Срезы ткани или другие образцы не должны быть слишком толстыми. Если он слишком толстый, большая часть возбуждающего света будет потребляться в нижней части образца, в то время как верхняя часть, непосредственно наблюдаемая объективом, не будет полностью возбуждаться. Кроме того, на решение влияет перекрытие ячеек или покрытие примесями.
(4) монтажный агент
Глицерин обычно используется в качестве монтажного агента, который не должен иметь автофлуоресценции, быть бесцветным и прозрачным, а яркость флуоресценции выше при pH 8,5-9,5, и его нелегко быстро выцветать. Поэтому в качестве монтажного агента обычно используется равная смесь глицерина и 0,5 моль/л карбонатного буферного раствора с рН от 9,0 до 9,5.
(5) зеркальное масло
Как правило, при наблюдении образцов с помощью темнопольных флуоресцентных микроскопов и масляных иммерсионных линз необходимо использовать иммерсионное масло. Лучше всего использовать специальное нефлуоресцентное иммерсионное масло. Вместо него также можно использовать вышеуказанный глицерин, а также можно использовать жидкий парафин, но показатель преломления у него низкий, что оказывает незначительное влияние на качество изображения. Влияние.
