Биомикроскопия в отношении объема блоков тканей
Биологическая микроскопия До сих пор фиксация на холоду, замороженные ультратонкие срезы и лиофилизация были обычными методами микросрезов тканей и клеток. Детали этого метода поясняются следующим образом:
Для биологических микроскопов с конденсором конденсор можно перемещать вверх и вниз, чтобы сделать яркость умеренной, а апертуру переменного света также можно изменить для достижения умеренной яркости 9b. Если свет солнечный, конденсор можно поднять соответствующим образом, а апертуру переменного источника света можно соответствующим образом увеличить. Если свет слишком сильный, конденсорную линзу можно соответствующим образом опустить, а апертуру пересекающегося света можно соответствующим образом уменьшить. Если вы все еще чувствуете ослепление в этом случае, вы можете выбрать соответствующий фильтр и разместить его на кронштейне под конденсатором. Этот дуб сможет получить ту яркость, которая вас удовлетворит. Конечно, регулировка верхнего и нижнего положений конденсора, регулировка размера апертуры переменного оптического показания и выбор подходящего фильтра требуют определенного периода практики для приобретения опыта.
Очень важным вопросом в биологической микроскопии является то, что в процессе отбора и разделения клеток, после лиофилизации и заливки смолой (FD), после замораживания ультратонких агрегатов и после лиофилизации содержание 65 элементов в каждой части необходимо осторожно обращаться. Анализируемые клетки не могут быть повреждены. Потому что рентгеновский микроанализ не только включает в себя много шагов, но и стоит дорого. Если анализируемые клетки являются поврежденными клетками или мертвыми клетками после долгой и многоэтапной обработки, очень прискорбно делать неверные выводы. Например, кардиомиоциты, разделенные обработкой коллагеназой, имеют две формы: одна — длинная палочка.
Биомикроскопия Количество и распределение электролитов в этих двух типах клеток весьма различны. Na очень высок, а K очень низок в циркулярных кардиомиоцитах, а концентрация Са в нематодах очень высока. После проверки другими методами анализа доказано, что высокое содержание Na и низкое содержание K в круглых клетках и высокое содержание Ca в митохондриях обусловлено повреждением клеточной мембраны в процессе разделения клеток. Метод ледяной фиксации клеток и тканей обычно заключается в том, чтобы сначала применить закалку и фиксацию, а затем сохранить их в жидком азоте. Закалочная фиксация очень важна для эффекта консервации. Живые клетки или свежие ткани богаты водой. При закалке части клеток или тканей, находящиеся в непосредственном контакте с измельченным хладагентом (особенно при закалке жидким азотом), часто замораживаются и фиксируются в первую очередь, образуя таким образом «оболочку», которая препятствует центральным частям ячеек измельченные и застывшие. Поэтому при анализе микрообластей Х-линии часто обнаруживается наличие кристаллов льда в центре более крупных клеток. Чтобы этого не произошло, в качестве разорванного хладагента используется вещество с температурой плавления выше, чем у жидкого азота, но ниже, чем у 806с. Таких веществ много, но самый простой в добыче, самый дешевый - это концентрированный пропан (температура кипения - 42.120c, температура плавления - 187.10c, молекулярная масса 44,1), а скорость охлаждения самая быстрая . Но его недостаток в том, что он легко воспламеняется.
Биологический микроскоп может поместить мышечное волокно на специальную стойку, чтобы, когда сокращение мышечного волокна достигает определенной фазы и нуждается в фиксации, немедленно запускать сопло для распыления жидкого пропана на мышечное волокно, чтобы погасить и зафиксировать его. Затем мышечные волокна вместе с каркасом извлекали и помещали в жидкий азот. При фиксации клеток крови или изолированных клеток сначала концентрируйте клетки путем центрифугирования на низкой скорости, перенесите клетки в серебряный флакон с хорошей теплопроводностью, поместите флакон в жидкий пропан и заморозьте для фиксации. При фиксации поджелудочной железы крысы в лаборатории Холла два стальных блока предварительно охлаждали жидким гелием (или жидким азотом), а два медных блока зажимали щипцами и помещали на переднюю и заднюю часть поджелудочной железы для охлаждения и фиксации. поджелудочная железа. Ткани или клетки можно хранить в жидком азоте для длительного хранения после закалки и фиксации.
Биологическая микроскопия В дополнение к наиболее уважаемому в настоящее время методу замороженных ультратонких срезов, существует еще один метод осаждения, используемый учеными. Вещество добавляется для образования осадка с анализируемым компонентом для его иммобилизации перед анализом, после чего осадок анализируется. Например, люди часто используют оксалат и пироантимонат для отложения кальция в мышечных клетках. Первый недостаточно чувствителен к низкой концентрации Са в цитоплазме; пироантимонат более чувствителен и может образовывать электронно-плотные отложения со свободным кальцием в головном мозге, но пироантимонат не совместим с натрием, марганцем, барием, железом. Отложения также образуются и менее специфичны. Процесс подготовки образцов подобен подготовке ультратонких срезов с помощью обычного просвечивающего электронного микроскопа, разница заключается в том, что 3-процентный пироантимонат калия (фосфатный буферный раствор, pH 7,6) фиксировали в течение 6 часов перед фиксацией, а на окрашенных ультратонких срезах мышц, На средних линиях полос А и 2 каждого саркомера были видны черные отложения, а неокрашенные срезы использовали для микрорентгеноспектрального анализа. Тетрагидрохлорид диаминобензидина (ДАБ) использовали для осаждения гемсодержащих веществ и т.д. Сочетание реакции гистохимической преципитации и рентгеновского микродифференцировочного моста можно рассматривать в лабораториях, не имеющих условий для замороженных ультратонких срезов. Полуколичественный анализ может быть выполнен в соответствии с высотой пика анализируемых элементов.
