Методы использования флуоресцентного микроскопа и меры предосторожности
Способ использования:
(1) Поместите лист материала на подставку.
(2) Включите регулятор напряжения флуоресцентного микроскопа. Затем нажмите кнопку запуска, чтобы зажечь УФ-лампу, которая не должна выключаться в течение 15 минут и не должна перезапускаться в течение 3 минут после выключения.
(3) Поверните фильтр возбуждения в положение v, дихроичную пленку в положение v, выберите блокирующий фильтр 495 или 475 нм.
(4) Выберите флуоресцентную микроскопию uvFL40, uvFL100.
(5) Добавьте нефлуоресцентное масло на предметное стекло, сначала 40-кратное, а затем 100-кратное фокусирующее микроскопирование. Покажите флуоресценцию.
(7) Поскольку флюоресцентный материал под воздействием ультрафиолетового облучения с ростом флуоресценции постепенно ослабевает с течением времени, поэтому при микроскопическом исследовании следует часто менять поле зрения.
(8) также можно использовать микроскопический материал с низким увеличением uvFL10 или uvFL20 (с низким увеличением без добавления нефлуоресцентного масла).
Метод регистрации флуоресцентного изображения:
Изображение флуоресценции, видимое с помощью флуоресцентного микроскопа, одно имеет морфологические характеристики, второе - цвет и яркость флуоресценции. При оценке результатов эти два изображения должны быть объединены с комплексным суждением. Результаты фиксируются по субъективным показателям, т. е. путем визуального наблюдения работника. Как общее качественное наблюдение, в основном достоверное. С развитием технологий и науки в той или иной степени появилось использование объективных показателей для записи результатов оценки, таких как использование клеточного спектрофотометра, анализатора изображений и других инструментов. Однако результаты, зафиксированные этими инструментами, также должны сочетаться с субъективными суждениями.
Технология фотографии с помощью флуоресцентного микроскопа очень необходима для записи флуоресцентных изображений, поскольку флуоресценция легко затухает и ослабевает, что позволяет мгновенно фиксировать результаты фотографии. Метод в основном такой же, как и обычная микрография. Просто нужно использовать высокоскоростную фотопленку, такую как ASA200 выше или 24 выше. Поскольку ультрафиолетовый свет на эффект вспышки флуоресценции, такой как маркеры FITC, при облучении ультрафиолетовым светом 30 с, яркость флуоресценции снижается на 50%. Поэтому скорость экспозиции слишком мала для захвата флуоресцентного изображения. Флуоресцентные микроскопы общего назначения имеют полуавтоматическую или полностью автоматическую систему микрофотографии.
Меры предосторожности:
(1) Действуйте в строгом соответствии с требованиями заводского руководства к флуоресцентному микроскопу, не меняйте процедуру произвольно.
(2) Проверка должна проводиться в темной комнате. Войдя в темную комнату, подключите источник питания, зажгите ртутную лампу сверхвысокого давления на 5-15мин, подождите, пока источник света не начнет излучать сильный свет для стабилизации и глаза полностью адаптируются к темной комнате, и затем начните наблюдать за образцом.
(3) Чтобы предотвратить повреждение глаз ультрафиолетовым светом, при регулировке источника света следует носить защитные очки.
(4) каждый раз проверяйте время до 1 ~ 2 часов, более 90 минут, интенсивность света ртутной лампы сверхвысокого давления постепенно снижается, флуоресценция ослабевает; образцы, облученные ультрафиолетом 3~5мин, флуоресценция также значительно ослабляется; поэтому * не должно превышать 2–3 часов.
(5) срок службы источника света флуоресцентного микроскопа ограничен, образец должен подвергаться централизованному контролю, чтобы сэкономить время и защитить источник света. Когда жарко, следует добавить вентиляторное охлаждение, новую лампочку следует записывать с начала использования. Если лампа погасла и ее можно использовать снова, перед зажиганием лампочку необходимо достаточно охладить. Источник света следует избегать несколько раз.
(6) Осмотрите образец сразу после окрашивания, поскольку флуоресценция со временем постепенно уменьшается. Если образец поместить в полиэтиленовый полиэтиленовый пакет, хранящийся при температуре 4 градуса, это может замедлить время ослабления флуоресценции и предотвратить испарение герметизирующего средства.
(7) Критерии оценки яркости флуоресценции: обычно делятся на четыре уровня, то есть «один» — отсутствие или видимая слабая флуоресценция. «+» — только отчетливо видимая флуоресценция. '+ +' — виден ярким
