Флуоресцентные микроскопы подразделяются на два типа в зависимости от их оптического пути:
1. Просвечивающий флуоресцентный микроскоп: источник возбуждающего света используется для возбуждения флуоресценции путем прохождения через материал образца через конденсорную линзу. Также можно использовать обычно используемые концентраторы темного поля, а обычные концентраторы можно использовать для регулировки отражателя для перенаправления и бокового лепестка возбуждающего света на образец. Это относительно старомодный флуоресцентный микроскоп. Его преимуществом является сильная флуоресценция при малом увеличении, но недостатком является то, что ее флуоресценция уменьшается с увеличением увеличения. Следовательно, лучше исследовать материалы более крупных образцов.
2. Флуоресцентный микроскоп падающего света — это новый тип флуоресцентного микроскопа, разработанный в наше время. В отличие от вышеописанного, возбуждающий свет падает из линзы объектива вниз на поверхность образца, используя ту же линзу объектива, что и конденсор освещения, и линзу объектива для сбора флуоресценции. К оптическому пути необходимо добавить двухцветный светоделитель, который находится на расстоянии 45 градусов от легкого урана. Угол: возбуждающий свет отражается в линзу объектива и фокусируется на образце. Флуоресценция, генерируемая образцом, а также возбуждающий свет, отраженный от поверхности линзы объектива и покровного стекла, попадают в линзу объектива и возвращаются в двухцветный светоделитель, разделяя возбуждающий свет и флуоресценцию. Остаточный свет возбуждения затем поглощается блокирующим фильтром. Если используются различные комбинации фильтров возбуждения/сепараторов двухцветных лучей/блокирующих фильтров, они могут удовлетворить потребности различных продуктов флуоресцентной реакции. Преимуществами этого флуоресцентного микроскопа являются равномерное освещение поля, четкое изображение и более сильная флуоресценция при большем увеличении.
(2) Инструкции по использованию флуоресцентного микроскопа.
1. Включите источник света. Ртутную лампу сверх-высокого давления необходимо предварительно нагреть в течение нескольких минут, чтобы она достигла максимальной яркости.
2. Просвечивающая флуоресцентная микроскопия требует установки необходимого фильтра возбуждения между источником лампы и конденсором и соответствующего заграждающего фильтра за объективом. Флуоресцентный микроскоп с падающим светом необходимо вставить необходимый блок фильтра возбуждения/двухцветного светоделителя/блокировочного фильтра в паз оптического пути.
3. Наблюдайте с помощью микроскопа с малым-увеличением и отрегулируйте центр источника света в соответствии с регулировочным устройством флуоресцентных микроскопов разных типов так, чтобы он располагался в центре всего пятна освещения.
4. Поместите образец и сфокусируйте его для наблюдения. Во время использования следует обратить внимание: не смотрите прямо в глаза перед установкой фильтра, чтобы избежать повреждения глаз; При наблюдении образцов с помощью масляного микроскопа необходимо использовать специальный нефлуоресцентный масляный микроскоп; После выключения ртутной лампы высокого-давления ее нельзя немедленно снова включить. Перезапуск занимает 5 минут, иначе он будет работать нестабильно и повлияет на срок службы ртутной лампы.
(3) При наблюдении под флуоресцентным микроскопом на обучающей платформе с использованием сине-фиолетового светофильтра можно увидеть клетки, окрашенные 0,01% флуоресцентным красителем акридинового оранжевого цвета. Ядро и цитоплазма возбуждаются, создавая флуоресценцию двух разных цветов (темно-зеленый и оранжево-красный).
