Технические параметры флуоресцентной микроскопии Методы и методы флуоресцентной микроскопии
Технические параметры флуоресцентного микроскопа 1. Широкоугольный окуляр 2. Ахроматическая линза объектива 3. Преобразователь объектива с четырьмя отверстиями 4. Эпифлуоресцентное устройство Синяя (B) Зеленая (G) система возбуждения 10Ртутная лампа 0 Вт 5. Коаксиальный механизм грубой и точной фокусировки: регулировка Диапазон фокусировки: 15 мм Размер сетки микродвижений: 0,002 мм 6. Двухслойный механический стол Диапазон продольного перемещения: 70 мм Диапазон бокового перемещения: 50 мм
Технические параметры флуоресцентного микроскопа
1. Широкоугольный окуляр
2. Ахроматический объектив
3. Револьверная головка с четырьмя апертурами
4. Эпифлуоресцентный прибор синий (B) зеленый (G) система возбуждения 100Вт ртутная лампа
5. Коаксиальный механизм грубой и точной регулировки фокуса: диапазон фокуса 15 мм, значение сетки точного перемещения 0,002 мм.
6. Двухслойный механический верстак
Диапазон вертикального перемещения: 70 мм Диапазон поперечного перемещения: 50 мм
Навыки и методы флуоресцентной микроскопии
(1) Предметное стекло
Толщина предметного стекла должна быть от 0,8 до 1,2 мм. Слишком толстое предметное стекло, с одной стороны, поглощает больше света, а с другой стороны, возбуждающий свет не может сконцентрироваться на образце. Слайды должны быть гладкими, однородными по толщине и не иметь явно выраженной аутофлуоресценции. Иногда используются предметные стекла из кварцевого стекла.
(2) Защитное стекло
Толщина покровного стекла составляет около 0,17 мм, гладкое. Для усиления возбуждающего света также можно использовать интерференционное покровное стекло, которое представляет собой специальное покровное стекло, покрытое несколькими слоями веществ (таких как фторид магния), оказывающих различное интерференционное воздействие на свет с разными длинами волн, что может сделать флуоресценция проходит гладко. Возбуждающий свет проходит и отражается, и этот отраженный возбуждающий свет возбуждает образец.
(3) Образец
Срезы ткани или другие образцы не должны быть слишком толстыми. Если он слишком толстый, большая часть возбуждающего света будет потребляться в нижней части образца, в то время как верхняя часть, непосредственно наблюдаемая объективом, не будет полностью возбуждаться. Кроме того, на решение влияет перекрытие ячеек или покрытие примесями.
(4) монтажный агент
Глицерин обычно используется в качестве монтажного агента, который не должен иметь автофлуоресценции, быть бесцветным и прозрачным, а яркость флуоресценции выше при pH 8,5-9,5, и его нелегко быстро выцветать. Поэтому в качестве монтажного агента обычно используется равная смесь глицерина и 0,5 моль/л карбонатного буферного раствора с рН от 9,0 до 9,5.
(5) зеркальное масло
Как правило, при наблюдении образцов с помощью темнопольных флуоресцентных микроскопов и иммерсионных линз с масляной иммерсией необходимо использовать иммерсионное масло. Лучше всего использовать специальное нефлуоресцентное иммерсионное масло. Вместо него также можно использовать вышеуказанный глицерин, а также можно использовать жидкий парафин, но показатель преломления у него низкий, что оказывает незначительное влияние на качество изображения. Влияние.
Принцип и конструктивные особенности флуоресцентного микроскопа
Флуоресцентная микроскопия использует точку с высокой световой отдачей для излучения света определенной длины волны (например, ультрафиолетового света 3650 дюймов или пурпурно-синего света 4200 дюймов) через систему фильтров в качестве возбуждающего света для возбуждения флуоресцентных веществ в образце для испускания флуоресценции различные цвета После этого наблюдайте через увеличение объектива и окуляра. Таким образом, на сильном контрастном фоне, даже если флуоресценция очень слабая, его легко идентифицировать и он обладает высокой чувствительностью. Он в основном используется для исследования клеточной структуры и функции и химического состава. Базовая структура флуоресцентного микроскопа состоит из обычного оптического микроскопа и некоторых аксессуаров (таких как флуоресцентный источник света, фильтр возбуждения, двухцветный светоделитель, блокирующий фильтр и т. д.). Флуоресцентный источник света — обычно используют ртутную лампу сверхвысокого давления (50-200W), которая может излучать свет с различными длинами волн, но каждое флуоресцентное вещество имеет длину волны возбуждения, при которой наблюдается наиболее сильная флуоресценция, поэтому фильтр возбуждения (как правило, существуют ультрафиолетовые, фиолетовые, синие и зеленые фильтры возбуждения), которые пропускают только возбуждающий свет определенной длины волны и облучают образец, поглощая другой свет. После того, как каждое вещество облучается возбуждающим светом, оно испускает видимую флуоресценцию с большей длиной волны, чем длина волны облучения, за очень короткое время. Флуоресценция специфична и обычно слабее, чем возбуждающий свет. Чтобы наблюдать специфическую флуоресценцию, необходимо добавить блокировку (или подавление) за линзой объектива и использовать ее в сочетании с ней.
Отличие флуоресцентного микроскопа от обычного микроскопа
1. Способ освещения обычно эпископический, т. е. источник света проецируется на образец через линзу объектива;
2. Источник света - ультрафиолетовый свет, длина волны короче, а разрешение выше, чем у обычных микроскопов;
3. Есть два специальных фильтра, один перед источником света используется для фильтрации видимого света, а другой между окуляром и объективом используется для фильтрации ультрафиолетовых лучей для защиты человеческого глаза.
Флуоресцентный микроскоп также является своего рода оптическим микроскопом, основное отличие которого заключается в том, что длина волны возбуждения у них разная. Это определяет разницу между флуоресцентным микроскопом и обычным оптическим микроскопом с точки зрения конструкции и использования.
Флуоресцентная микроскопия является важным инструментом в иммунофлуоресцентной цитохимии. Он состоит из основных компонентов, таких как источник света, система фильтрующих пластин и оптическая система. Это использование определенной длины волны света для возбуждения флуоресценции образца и наблюдения за флуоресцентным изображением образца путем усиления объектива и системы окуляров.
