Флуоресцентное наблюдение оптического микроскопа
Флуоресценция относится к процессу, при котором флуоресцентное вещество излучает свет с большей длиной волны почти одновременно, когда оно облучается светом с определенной длиной волны (рис. 1). Когда свет определенной длины волны (длина волны возбуждения) попадает на молекулу, например, в флуорофоре, энергия фотона поглощается электронами молекулы. Затем электроны переходят из основного состояния (S0) в более высокий энергетический уровень, возбужденное состояние (S1'). Этот процесс называется возбуждением ①. Электрон остается в возбужденном состоянии в течение 10-9–10-8 секунд, в течение которых электрон теряет часть энергии②. В процессе выхода электронов из возбужденного состояния (S1) и возврата в основное состояние ③ высвобождается оставшаяся энергия, поглощенная в процессе возбуждения.
Флуоресцентная диаграмма Яблонского
Время пребывания флуоресцентной молекулы в возбужденном состоянии представляет собой время жизни флуоресценции, которое обычно находится на уровне наносекунд и является неотъемлемой характеристикой самой флуоресцентной молекулы. Визуализация времени жизни флуоресценции (FLIM), в которой используется технология визуализации времени жизни флуоресценции, позволяет выполнять более подробные функциональные измерения в дополнение к визуализации интенсивности флуоресценции, а также получать молекулярную конформацию, межмолекулярные взаимодействия, микроокружение молекул и т. д. Информация, которую трудно получить. получить с помощью обычного оптического изображения.
Еще одним важным свойством флуоресценции является стоксов сдвиг, разница длин волн между пиками возбуждения и излучения (рис. 2). Обычно длина волны излучения больше, чем длина волны возбуждения. Это связано с тем, что электроны будут терять часть своей энергии в процессе релаксации после возбуждения флуоресцентного вещества и до испускания фотонов. Флуоресцентные вещества с большими стоксовыми сдвигами легче наблюдать под флуоресцентным микроскопом.
флуоресцентный микроскоп
Флуоресцентный микроскоп — это оптический микроскоп, который использует свойства флуоресценции для наблюдения и визуализации и широко используется в различных областях, таких как клеточная биология, нейробиология, ботаника, микробиология, патология и генетика. Флуоресцентная визуализация обладает преимуществами высокой чувствительности и высокой специфичности и очень подходит для наблюдения за распределением специфических белков и органелл в тканях и клетках, изучения колокализации и взаимодействия, отслеживания жизненных динамических процессов, таких как изменения концентрации ионов. , и т. д.
Большинство молекул в клетках не флуоресцируют, и если вы хотите их увидеть, вы маркируете их флуоресцентно. Существует множество методов флуоресцентной маркировки, например, прямая маркировка (например, с использованием DAPI для маркировки ДНК) или иммунное окрашивание с использованием антигенсвязывающих свойств антител или использование флуоресцентных белков (таких как GFP, зеленый флуоресцентный белок) для мечения белков-мишеней. и обратимое связывание. синтетические красители (например, Fura-2) и т. д.
Инвертированный флуоресцентный микроскоп MF53-N
В настоящее время флуоресцентный микроскоп стал стандартным оборудованием для визуализации в различных лабораториях и платформах визуализации и является хорошим помощником в наших повседневных экспериментах. Флуоресцентные микроскопы в основном делятся на три категории: прямые флуоресцентные микроскопы (подходят для срезов), инвертированные флуоресцентные микроскопы (подходят для живых клеток с учетом секций), флуоресцентные стереоскопы (подходят для более крупных образцов, таких как растения, рыбки данио (взрослые/эмбриональные ), медака, органы мыши/крысы и др.).
Технология визуализации флуоресцентной микроскопии широко используется и богата типами, и новые технологии все еще появляются. Вы можете выбрать технологию для завершения собственного исследования.
