Как отрегулировать интенсивность лазера лазерного сканирующего конфокального микроскопа
Существует два фактора регулировки интенсивности лазера: ручка регулировки мощности и акусто-оптический перестраиваемый фильтр (AOTF).
1. Ручка управления мощностью: обычно устанавливается на 30 % от максимального значения. Увеличение мощности сократит срок службы лазера и создаст лазерный шум. AOTF, PMT и т. д. следует отрегулировать в первую очередь, чтобы получить наилучшую интенсивность.
2. Акустооптический настраиваемый фильтр: контролирует луч возбуждающего света и его интенсивность, а также может включать или выключать лазер или регулировать его в диапазоне 0–100 % в течение миллисекунд. Это позволяет использовать разные лазерные лучи для каждой точки изображения и выбирать необходимую интенсивность.
Принцип работы: он использует эффект дифракции Брэгга звуковых волн, распространяющихся в различных средах, на падающую дифракцию Брэгга в среде распространения. Когда на вход поступает радиочастотный сигнал определенной частоты, AOTF дифрагирует падающий полихроматический свет и выбирает монохроматический свет с длиной волны входного сигнала. Длина волны монохроматического света соответствует единице--одне с радиочастотой f. Пока электрический сигнал настроен, выходную длину волны можно быстро и случайным образом изменить. AOTF обеспечивает непрерывную регулировку интенсивности лазера и имеет функцию быстрой регулировки, реализующую локальную стимуляцию и сканирование, быстрое переключение длины волны (микросекундный уровень). В лазерной конфокальной микроскопии фотоумножители не могут увеличивать интенсивность лазера, но могут регулировать интенсивность света после визуализации. Следовательно, регулируя напряжение фотоумножителя, можно регулировать яркость изображения. Кроме того, размер фокусного отверстия влияет на количество фотонов, а также может регулировать яркость изображения. Фотоумножитель — это специальная вакуумная трубка, чрезвычайно чувствительная к ультрафиолетовому, видимому и ближнему-инфракрасному свету. Он может усиливать входящий слабый световой сигнал в 108 раз, что позволяет измерять световой сигнал.
