Введение в улучшенные преимущества лазерной сканирующей многофотонной микроскопии
Лазерный сканирующий многофотонный микроскоп является значительным улучшением оптической микроскопии, в основном проявляется в способности наблюдать за глубокими структурами живых клеток, фиксированных клеток и тканей, и получает четкие и острые многослойные Z-плосковые структуры, а также оптические срезы, которые могут использоваться для создания трехмерных твердых структур образцов. Конфокальный микроскоп использует лазерный источник света, который расширяется для заполнения всей фокальной плоскости объективной линзы, а затем сходится в очень небольшие точки на фокальной плоскости образца через систему линзы объективной линзы. В соответствии с численной апертурой объективной линзы, диаметр точки яркого освещения составляет около 0. 25-0. 8 µ m, а глубина примерно 0. 5-1. 5 µ m. Размер конфокальной точки определяется с помощью конструкции микроскопа, длины волны лазера, объективными характеристиками, настроек состояния сканирования и свойств образца. Диапазон освещения и глубина полевого микроскопа большие, в то время как освещение конфокального микроскопа сосредоточено на фокусе на фокальной плоскости. Основное преимущество конфокальной микроскопии состоит в том, что она может выполнять мелкое оптическое сечение на толстых флуоресцентных образцах (до 5 0 мкм или более) с толщиной приблизительно от 0,5 до 1,5 мкм. Серия изображений оптических среза может быть получена путем перемещения образца вверх и вниз, используя оси Z-шаговый двигатель микроскопа. Сбор информации о изображении контролируется в плоскости * *, без вмешательства из сигналов, испускаемых из других позиций на образце. После удаления влияния фоновой флуоресценции и увеличения соотношения сигнал / шум контраст и разрешение конфокальных изображений значительно улучшаются по сравнению с традиционными флуоресцентными изображениями полета. Во многих образцах замысловатые структурные компоненты переплетаются с образованием сложных систем, но как только можно собрать достаточно оптических срезов, мы можем использовать программное обеспечение для реконструкции их в трех измерениях. Этот экспериментальный метод широко использовался в биологических исследованиях для выяснения сложных структурных и функциональных отношений между клетками или тканями.
