Приготовление и наблюдение биологических образцов для электронных микроскопов
Разрешение микроскопа зависит от длины волны используемого света. Электронный микроскоп, появившийся в 1933 году, достиг значительно более высокого разрешения, чем оптический микроскоп, благодаря использованию в качестве источников света электронных лучей с длиной волны, намного меньшей, чем видимый свет. Различные источники света также определяют ряд различий между электронными и оптическими микроскопами.
В зависимости от различий в принципах получения изображений электронными лучами и способах их воздействия на образцы современные электронные микроскопы разделились на множество типов. В настоящее время наиболее распространенными являются трансмиссионные электронные микроскопы и сканирующие электронные микроскопы. Первый имеет общее увеличение, которое может варьироваться в пределах 1000-10000000 раз, а второй имеет общее увеличение, которое может варьироваться в пределах 20-300000 раз. Этот эксперимент в основном представляет собой подготовку двух типов образцов микроскопа: просвечивающую электронную микроскопию и сканирующую электронную микроскопию.
2, Оборудование
1. Штамм Escherichia coli склонен.
2. Раствор или реактив: пентилацетат, концентрированная серная кислота, безводный этанол, стерильная вода, 2% водный раствор фосфорновольфрамата натрия (рН 6,5-8,0), 0,3% раствор поливинилформальдегида (растворенный в хлороформе), цитохром С, ацетат аммония, плазмида pBR322.
3. К инструментам или другим инструментам относятся обычные оптические микроскопы, медные сетки, фарфоровые воронки, химические стаканы, чашки Петри, стерильные капельницы, стерильные пинцеты, булавки, предметные стекла, счетные пластины, машины для нанесения вакуумного покрытия, сушилки для критических точек и т. д.
3, этапы работы
(1) Подготовка и наблюдение образцов для просвечивающей электронной микроскопии
1. Обработка металлической сетки
Образец оптического микроскопа помещают на предметное стекло для наблюдения. Однако в пропускающем зеркале, поскольку электроны не могут проникнуть через стеклянный лист, в качестве носителя можно использовать только сетчатый материал, обычно называемый несущей сеткой. Несущую сетку можно разделить на различные спецификации в зависимости от материалов и форм, среди которых обычно используется медная сетка с размером ячеек 200-400 (количество отверстий). Медную сетку следует обработать перед использованием, чтобы удалить грязь и сохранить ее в чистоте, в противном случае это повлияет на качество поддерживающей пленки и четкость фотографий образцов. Медную сетку размером 400 меш, использованную в этом эксперименте, можно обработать следующим методом: сначала замочить и поплавить в пентилацетате на несколько часов, затем несколько раз промыть дистиллированной водой и, наконец, погрузить и поплавить медную сетку в безводном этаноле для обезвоживания. Если медная сетка после вышеописанных способов все еще не чистая, ее можно замочить в разбавленной концентрированной серной кислоте (1:1) на 1-2 минуты или прокипятить в 1% растворе NaOH в течение нескольких минут, промыть несколько раз дистиллированной водой, а затем обезвоживать в безводном этаноле для дальнейшего использования.
