Разница между просвечивающей флуоресцентной микроскопией и отражательной флуоресцентной микроскопией
1. Просвечивающий флуоресцентный микроскоп: источник возбуждающего света проходит через материал образца через конденсатор для возбуждения флуоресценции. Обычно используемые концентраторы темного поля или обычные концентраторы можно использовать для регулировки отражателя для преобразования возбуждающего света и бокового света на образец. Это относительно старомодный флуоресцентный микроскоп. Его преимуществом является сильная флуоресценция при малом увеличении, а недостатком — ослабление флуоресценции с увеличением увеличения. Поэтому лучше исследовать образцы большего размера.
2. Флуоресцентный микроскоп с падающим лучом. Это новый тип флуоресцентного микроскопа, разработанный в наше время. В отличие от предыдущего, свет возбуждения падает с объектива на поверхность образца, используя тот же объектив, что и конденсор освещения, и объектив для сбора флуоресценции. К оптическому пути необходимо добавить двухцветный сепаратор лучей, который образует угол 45 градусов с фотоураном. Возбуждающий свет отражается в линзу объектива и собирается на образце. Флуоресценция, генерируемая образцом, и возбуждающий свет, отраженный от поверхности линзы объектива и покровного стекла, одновременно попадают в линзу объектива и возвращаются в сепаратор двухцветных лучей, разделяя свет возбуждения и флуоресценцию. Остаточный свет возбуждения затем поглощается блокирующим фильтром. Если используются различные комбинации фильтров возбуждения, сепараторов двухцветных лучей и блокирующих фильтров, они могут удовлетворить потребности различных продуктов флуоресцентных реакций. Преимуществами этого флуоресцентного микроскопа являются равномерное освещение поля зрения, четкое изображение и более сильная флуоресценция при большем увеличении.
Преимущества и недостатки трансмиссионной флуоресцентной микроскопии.
Источник света: ртутная лампа высокого давления или галогенная лампа.
Зеркало-прожектор: использование прожектора темного поля для разделения возбуждения и флуоресценции.
Объектив: Можно использовать любой тип объектива.
Образец: Тонкие образцы больше подходят для наблюдения за передачей.
Преимущества: ① Благодаря использованию конденсора темного поля возбуждающий свет не может попасть в объектив, что позволяет легко сформировать темный фон и добиться хорошего контраста, а для наблюдения можно использовать любой объектив. ② При использовании объектива с малым увеличением он ярче, чем у отражающего флуоресцентного микроскопа.
Недостаток: Центр и высоту прожектора необходимо правильно отрегулировать, иначе невозможно получить яркое флуоресцентное изображение. Из-за ограничения фокусного расстояния прожектора темного поля нельзя использовать толстые предметные стекла. Площадь освещения поля зрения не должна быть слишком большой, иначе это может привести к исчезновению цвета флуоресценции флуоресцентного образца. Толстые или непрозрачные образцы не подходят.
