Принцип, характеристики и применение люминесцентного микроскопа.
Принцип и структурные характеристики флуоресцентного микроскопа: в флуоресцентном микроскопе используется точечный источник света с высокой светоотдачей для излучения определенной длины волны света (например, ультрафиолетового света 3650 дюймов или пурпурно-синего света 4200 дюймов) через систему фильтров в качестве возбуждения. света для стимуляции флуоресценции в образце. После того, как вещество излучает флуоресценцию различных цветов, его наблюдают через увеличение объектива и окуляра. Таким образом, на сильном контрастном фоне, даже если флуоресценция очень слабая, его легко идентифицировать и он обладает высокой чувствительностью. Он в основном используется для исследования клеточной структуры и функции и химического состава. Базовая структура флуоресцентного микроскопа состоит из обычного оптического микроскопа и некоторых аксессуаров (таких как флуоресцентный источник света, фильтр возбуждения, двухцветный светоделитель, блокирующий фильтр и т. д.). Флуоресцентный источник света — обычно используют ртутную лампу сверхвысокого давления (50-200W), которая может излучать свет с различными длинами волн, но каждое флуоресцентное вещество имеет длину волны возбуждения, при которой наблюдается наиболее сильная флуоресценция, поэтому фильтр возбуждения (как правило, существуют ультрафиолетовые, фиолетовые, синие и зеленые фильтры возбуждения), которые пропускают только возбуждающий свет определенной длины волны и облучают образец, поглощая другой свет. После того, как каждое вещество облучается возбуждающим светом, оно испускает видимую флуоресценцию с большей длиной волны, чем длина волны облучения, за очень короткое время. Флуоресценция специфична и обычно слабее, чем возбуждающий свет. Для наблюдения специфической флуоресценции за линзой объектива требуется блокирующий (или подавляющий) фильтр.
Он имеет две функции: первая — поглощать и блокировать попадание возбуждающего света в окуляр, чтобы не нарушать флуоресценцию и не повреждать глаза; другой - выбрать и пропустить определенную флуоресценцию, показывая определенный флуоресцентный цвет. Два фильтра должны использоваться вместе.
Существует два типа флуоресцентных микроскопов с точки зрения оптического пути:
1. Просвечивающий флуоресцентный микроскоп: источник возбуждающего света проходит через материал образца через конденсорную линзу для возбуждения флуоресценции. Обычно используется коллектор темного поля, и обычный коллектор также можно использовать для регулировки зеркала, чтобы свет возбуждения перенаправлялся и обводился на образец. Это старый флуоресцентный микроскоп. Преимущество состоит в том, что флуоресценция сильная при малом увеличении, а недостаток в том, что флуоресценция уменьшается с увеличением увеличения. Поэтому лучше наблюдать за более крупными образцами материалов.
2. Эпифлуоресцентный микроскоп - это новый тип флуоресцентного микроскопа, разработанный в наше время. Отличие состоит в том, что возбуждающий свет падает от линзы объектива вниз на поверхность образца, т. е. одна и та же линза объектива используется в качестве осветительного конденсора и линзы объектива для сбора флуоресценции. На пути света необходимо добавить дихроичный светоделитель, который находится на расстоянии 45 градусов от легкого урана. Возбуждающий свет отражается в линзу объектива и собирается на образце. Флуоресценция, генерируемая образцом, и свет возбуждения, отраженный поверхностью линзы объектива и поверхностью покровного стекла, одновременно попадают в линзу объектива и возвращаются в двухцветный светоделитель, чтобы свет возбуждения отделялся от флуоресценции. остаточное возбуждение поглощается блокирующими фильтрами. Например, переход на комбинацию различных фильтров возбуждения / двухцветных светоделителей / блокирующих фильтров может удовлетворить потребности различных флуоресцентных продуктов реакции. Преимущество этого вида флуоресцентного микроскопа в том, что освещение поля зрения равномерное, изображение четкое, а чем больше увеличение, тем сильнее флуоресценция.
Как пользоваться флуоресцентным микроскопом
1. Включите источник света, и ртутная лампа сверхвысокого давления должна прогреться в течение нескольких минут, чтобы достичь самой яркой точки.
2. В трансмиссионном флуоресцентном микроскопе необходимо установить требуемый фильтр возбуждения между источником света и конденсором, а также установить соответствующий блокирующий фильтр за линзой объектива. В эпифлуоресцентных микроскопах необходимо вставлять необходимые фильтры возбуждения/двухцветные разделители лучей/блокирующие фильтры в прорези на оптическом пути.
3. Наблюдайте с помощью объектива с малым увеличением и отрегулируйте центр источника света так, чтобы он располагался в центре всего пятна освещения в соответствии с устройством настройки различных моделей флуоресцентных микроскопов.
4. Поместите образец и наблюдайте после фокусировки. Во время использования следует соблюдать осторожность: не наблюдайте непосредственно за концевым фильтром, чтобы не повредить глаза; при наблюдении экземпляров с масляной линзой необходимо использовать специальную масляную линзу без флуоресценции; после выключения ртутной лампы высокого давления ее нельзя сразу снова включить, и она нуждается в проверке. Его можно перезапустить через 5 минут, иначе он будет работать нестабильно и повлияет на срок службы ртутной лампы.
