Роль каждого фильтра во флуоресцентной микроскопии.
Наиболее важной проблемой флуоресцентной микроскопии является комбинация фильтров, при этом как фильтр возбуждения, так и экранирующий фильтр должны подходить для наблюдаемого флуоресцентного объекта и сочетаться друг с другом. В некоторых конкретных целях ошибка в выборе фильтра может привести к недоразумениям и даже неверным результатам. Достижения технологии флуоресцентной микроскопии и использование высококачественных фильтров и оригинальных фильтрующих групп неразделимы. Существует несколько типов фильтров для флуоресцентной микроскопии.
1. Теплопоглощающий фильтр.
Теплопоглощающий фильтр является необходимым фильтром для предотвращения повреждения группы оптического прибора тепловым излучением в спектре источника света. Ранние усовершенствованные микроскопы были оснащены бутылями в форме барабана, в которых могла храниться дистиллированная вода в качестве теплопоглощающего устройства. Современные крупномасштабные исследовательские микроскопы оснащены стеклянными теплопоглощающими фильтрами в световых коробах или камерах источников света, которые представляют собой прозрачные, слегка желтоватые листы стекла. Фильтры Leitz KG1 (2 мм) и BG38 (4 мм) пропускают практически все спектры ультрафиолетового и видимого света, что делает их фильтрами со световым потоком до 98%. Он лишь избирательно поглощает линии инфракрасного фототермического излучения.
2. Фильтр возбуждения
Фильтры возбуждения могут избирательно поглощать длинноволновые спектральные линии и передавать только ультрафиолетовый свет. Фильтры фиолетового, синего и зеленого света являются фильтрами возбуждения. Zeiss, Reichert, Olympus B-серии, G-серии, серии BG, серии Shott UG, Opton H, G, серии BP, серии Leitz BP и других фильтров являются фильтрами возбуждения.
3. Блокирующий фильтр
Блокирующий фильтр — это фильтр, который избирательно поглощает коротковолновые спектральные линии и инфракрасное излучение, позволяя наблюдателю видеть флуоресценцию, излучаемую тестируемым объектом, одновременно защищая роговицу от повреждения УФ-излучением.
4. Фильтр разделения цветового света.
Цветной светоразделительный фильтр — это фильтр, который отражает возбуждающий свет на тестируемый объект, заставляя объект излучать флуоресценцию, а затем передает флуоресценцию на окуляр. Этот тип фильтра можно использовать только в концентраторах падающего луча, тогда как флуоресцентная микроскопия на просвет не требует разделения цветов.
5. Фильтр помех
Фильтр помех представляет собой разновидность высокоэффективного фильтра возбуждения. Это фильтр, изготовленный путем укладки нескольких тонких металлических пленок между двумя листами полированного стекла. Показатель преломления каждой тонкой металлической пленки различен, поэтому спектральные линии разных длин источника света освещения неоднократно отражаются от каждой металлической пленки, в результате чего некоторые длины волн спектральных линий компенсируются из-за деструктивной интерференции, а другие усиливаются за счет аддитивные помехи и передаваемые через них. В результате получается фильтр с узким спектром пропускания, шириной полупика всего 6–20 нм и коэффициентом пропускания 60–70%.
