К специальным конструкциям флуоресцентных микроскопов относятся:
(1) Система цветных фильтров
Блок цветных фильтров является важной частью флуоресцентного микроскопа, и его основные компоненты состоят из первого барьерного фильтра для возбуждающего света, второго барьерного фильтра для излучаемого света и светоделительного зеркала. Модели цветных фильтров и названия различных производителей часто не совпадают.
1. Световой фильтр возбуждения и фильтр эмиссионного света. В зависимости от характеристик источника света и флуоресцентного пигмента обычно выбираются следующие три типа согласования, чтобы обеспечить возбуждающий свет в определенном диапазоне длин волн и позволить флуоресценции, возбуждаемой образцом, пройти и достичь окуляра для визуализации.
УФ-возбуждение: фильтр возбуждающего света может пропускать ультрафиолетовый свет и блокировать прохождение видимого света с длиной волны более 400 нм. Соответствующий эмиссионный светофильтр пропускает синий свет, и свет в поле зрения кажется синим, например, при окрашивании DAPI.
Возбуждение синим светом: Световой фильтр возбуждения может пропускать синий свет и блокировать свет других длин волн. Соответствующий эмиссионный светофильтр пропускает зеленый свет, например, маркеры окрашивания GFP.
Возбуждение зеленым светом: Световой фильтр возбуждения пропускает зеленый свет и блокирует свет других длин волн. Соответствующий эмиссионный светофильтр обычно пропускает красный свет, например, при окрашивании родамином.
2. Полупрозрачный и полуотражающий цветной фильтр: его функция состоит в том, чтобы полностью блокировать прохождение возбуждающего света и отражать его; И излучают свет в соответствующем диапазоне длин волн. Его модель соответствует светофильтру возбуждения и светофильтру излучения.
(2) Объектив и окуляр
Можно использовать различные объективы, но лучше всего выбирать линзы с дополнительным масштабом и уменьшением хроматических аберраций, поскольку их собственная флуоресценция чрезвычайно низка, а их характеристики светопропускания (диапазон длин волн) подходят для флуоресценции. В связи с тем, что яркость флуоресценции изображения в поле микроскопа прямо пропорциональна квадрату светосилы объектива и обратно пропорциональна его увеличению, для повышения яркости флуоресцентных изображений следует использовать объектив с большей светосилой. Особенно для образцов с недостаточной флуоресценцией следует использовать объектив с высокой светосилой и высоким светопропусканием в сочетании с окуляром с минимально возможным увеличением.
(3) Другие оптические устройства
Отражающий слой зеркала обычно покрыт алюминием, поскольку алюминий поглощает меньше ультрафиолетового и видимого света в сине-фиолетовой области, отражая более 90% (в то время как серебро имеет отражательную способность только 70%). Обычно используются плоские зеркала. Фокусирующая линза, специально разработанная и изготовленная для флуоресцентных микроскопов, изготавливается из кварцевого стекла или другого стекла, пропускающего ультрафиолет. Устройство падающего света, помимо функции источника пропускающего света, больше подходит для прямого наблюдения за непрозрачными и полупрозрачными образцами, такими как толстые листы, мембраны фильтров, колонии бактерий, культуры тканей и другие образцы. В последние годы было разработано множество новых типов флуоресцентных микроскопов с использованием устройства падающего света, известного как флуоресцентный микроскоп падающего света.
