Два широко используемых метода микроскопического наблюдения
1. Наблюдение в темном поле
Темное поле зрения на самом деле является освещением темного поля. Его характеристики отличаются от яркого поля зрения, поскольку оно не наблюдает непосредственно освещающий свет, а скорее наблюдает отраженный или преломленный свет проверяемого объекта. Таким образом, поле зрения становится темным фоном, в то время как проверяемый объект представляет собой яркое изображение.
Принцип темного поля основан на оптическом явлении Тиндаля, при котором частицы пыли не могут быть замечены человеческим глазом при воздействии сильного света из-за дифракции, вызванной сильным светом. Если свет проецируется на пыль под углом, частицы кажутся увеличивающимися в объеме из-за отражения света, что делает их видимыми для человеческого глаза.
Специальным аксессуаром, необходимым для наблюдения в темном поле, является прожектор в темном поле. Его особенность заключается в том, что он не позволяет лучу света проходить через объект снизу вверх, а изменяет путь света, чтобы он был направлен под углом к объекту, так что свет освещения не попадает непосредственно в линзу объектива, и использует яркое изображение, образованное отражением или дифракцией света на поверхности обследуемого объекта. Разрешение наблюдения в темном поле намного выше, чем разрешение наблюдения в светлом поле, достигая 0,02-0,004
2. Метод проверки фазово-контрастного зеркала.
Успешное изобретение фазово-контрастной микроскопии при разработке оптических микроскопов является важным достижением в современной микроскопической технике. Мы знаем, что человеческий глаз способен различать только длину волны (цвет) и амплитуду (яркость) световых волн. Для бесцветных и прозрачных биологических образцов при прохождении света длина волны и амплитуда изменяются незначительно, что затрудняет наблюдение образца в ярком поле.
Фазово-контрастный микроскоп использует разницу в длине оптического пути проверяемого объекта для зеркального осмотра, эффективно используя явление интерференции света для преобразования разности фаз, которую невозможно различить человеческим глазом, в различимую разность амплитуд. Даже бесцветные и прозрачные вещества могут стать отчетливо видимыми. Это значительно облегчает наблюдение за живыми клетками, поэтому фазово-контрастная микроскопия широко применяется в инвертированных микроскопах.
Основной принцип фазово-контрастной микроскопии заключается в преобразовании разности оптических путей видимого света, проходящего через образец, в разность амплитуд, тем самым улучшая контраст между различными структурами и делая их четкими и видимыми. После прохождения через образец свет преломляется, отклоняясь от исходного оптического пути и задерживаясь на 1/4 λ (длины волны). Если оптическая разность хода увеличивается или уменьшается еще на 1/4 λ, оптическая разность хода становится 1/2 λ, а интерференция между двумя световыми лучами увеличивается или уменьшается после объединения осей, улучшая контраст. С точки зрения конструкции фазово-контрастные микроскопы имеют два
особые отличия от обычных оптических микроскопов:
1. Между источником света и конденсором расположена кольцевая диафрагма, функция которой заключается в формировании полого конуса света, который проходит через конденсор и фокусируется на образце.
2. Угловая фазовая пластинка: к линзе объектива добавлена фазовая пластинка, покрытая фторидом магния, которая может задерживать фазу прямого или дифрагированного света на 1/4 λ. Его можно разделить на два типа:
(1) . Фазовая пластина A+: задержите прямой свет на 1/4 λ и добавьте два набора световых волн после объединения осей. Амплитуда увеличивается, и структура образца становится ярче окружающей среды, образуя яркий контраст (или отрицательный контраст).
(2) . Фазовая пластина B+: задерживает дифрагированный свет на 1/4 λ и вычитает световые волны после объединения осей двух наборов световых лучей, что приводит к уменьшению амплитуды и формированию темного контраста (или положительного контраста). Структура становится темнее окружающей среды.
