В чем преимущества конфокальной лазерной микроскопии
По сравнению с традиционными широкопольными микроскопами лазерная сканирующая конфокальная микроскопия имеет характеристики высокой четкости, высокого разрешения и высокой чувствительности. Он широко используется в области биомедицины и стал важным инструментом визуализации в этой области. Почему конфокал так полюбился и какие у него преимущества? В этой статье перечислены три аспекта для обсуждения преимуществ конфокального сканирования.
Собирайте сигнал только в фокальной плоскости, делая изображение четким и не размытым.
Так как же конфокальная микроскопия достигает этого преимущества? Это связано с ключевым конфокальным оборудованием — точечным отверстием, как показано на рис. 2. Это небольшое отверстие перед детектором расположено в оптической плоскости, сопряженной с фокальной плоскостью образца. Когда возбуждающий свет облучает образец, фокальная плоскость и нефокальная плоскость области образца будут возбуждаться для генерации сигналов флуоресценции, отрегулируйте соответствующий размер точечного отверстия (обычно 1 Au), чтобы сигнал флуоресценции в фокальной плоскости (зеленая пунктирная линия) могут быть флуоресцентными сигналами (красная и синяя пунктирные линии), которые проходят через точечное отверстие и достигают детектора вне фокальной плоскости, но не могут достигать детектора через точечное отверстие. Благодаря добавлению аппаратных отверстий конфокальный микроскоп может получать четкие и высококачественные изображения, не изменяя метод изготовления обычных флуоресцентных микроскопов.
Из-за наличия отверстия мы можем получить сигнал только в фокальной плоскости и получить двумерное изображение с высоким разрешением. Путем непрерывной регулировки положения оси Z можно получить двухмерные изображения в различных положениях оси Z, а также серию непрерывных изображений «оптического среза». После получения этих оптических срезов 3D-модуль, оснащенный программным обеспечением прибора, можно использовать для реконструкции 3D-изображения для создания четкого 3D-изображения. Эта неразрушающая непрерывная коллекция изображений оптических срезов реализует функцию «клеточной КТ».
Точность результатов колокализации тесно связана с разрешением изображения, поэтому нам необходимо выбрать метод визуализации с более высоким разрешением при проведении экспериментов по колокализации. По сравнению с традиционными микроскопами конфокальная микроскопия стала мощным инструментом для исследования колокализации благодаря преимуществам высокого разрешения.
Из-за наличия дифракционного предела обычное конфокальное оптическое разрешение составляет около 200 нм. Когда нам нужно наблюдать за структурами размером более 200 нм, конфокальная камера может точно определить степень колокализации. Если требуется анализ колокализации, можно выбрать модуль анализа колокализации, установленный в конфокальном программном обеспечении.
