В чем разница между флуоресценцией и лазерной конфокальной микроскопией?
флуоресцентный микроскоп
1. Флуоресцентный микроскоп — это устройство, которое использует ультрафиолетовый свет в качестве источника света для освещения испытуемого объекта, заставляя его излучать флуоресценцию, а затем наблюдает за формой и положением объекта под микроскопом. Флуоресцентная микроскопия используется для изучения всасывания, транспорта, распределения и локализации веществ внутри клеток. Некоторые вещества в клетках, например хлорофилл, могут излучать флуоресценцию после воздействия ультрафиолетового излучения; Некоторые вещества сами по себе могут не излучать флуоресценцию, но при окраске флуоресцентными красителями или флуоресцентными антителами они также могут излучать флуоресценцию под действием ультрафиолетового излучения. Флуоресцентная микроскопия является одним из инструментов качественного и количественного исследования этих веществ.
2. Принцип флуоресцентного микроскопа:
(A) Источник света: Источник света излучает свет различной длины волны (от ультрафиолетового до инфракрасного).
(B) Источник света с фильтром возбуждения: пропускает свет определенной длины волны, который может вызывать флуоресценцию в образце, блокируя при этом свет, бесполезный для возбуждения флуоресценции.
(C) Флуоресцентные образцы: обычно окрашиваются флуоресцентными пигментами.
(D) Блокирующий фильтр: избирательно передает флуоресценцию, блокируя возбуждающий свет, который не был поглощен образцом, а некоторые длины волн также избирательно передаются при флуоресценции. Микроскоп, использующий ультрафиолетовый свет в качестве источника света для излучения флуоресценции облучаемого объекта. Электронный микроскоп был впервые собран Кнорром и Харроской в Берлине, Германия, в 1931 году. В этом типе микроскопа вместо луча света используется высокоскоростной электронный луч. Из-за гораздо более короткой длины волны электронного потока по сравнению со световыми волнами увеличение электронного микроскопа может достигать 800000 раз с минимальным пределом разрешения 0,2 нанометра. Сканирующий электронный микроскоп, который начали использовать в 1963 году, позволяет людям видеть мельчайшие структуры на поверхности объектов.
3. Область применения: используется для увеличения изображений мелких объектов. Обычно используется для наблюдения за биологией, медициной, микроскопическими частицами и т. д.
конфокальный микроскоп
1. Конфокальный микроскоп добавляет к пути отраженного света полуотражающую линзу, которая изгибает отраженный свет, уже прошедший через линзу, в других направлениях. В фокусе есть перегородка с точечным отверстием, а в фокусе расположено маленькое отверстие. За перегородкой находится фотоумножитель. Можно представить, что отраженный свет до и после фокуса света обнаружения не может быть сфокусирован на небольшом отверстии через эту конфокальную систему и будет блокироваться перегородкой. Таким образом, фотометр измеряет интенсивность отраженного света в фокусной точке.
2. Принцип: в традиционных оптических микроскопах используются источники полевого света, и на изображение каждой точки образца будет влиять дифракция или рассеянный свет от соседних точек; Лазерный сканирующий конфокальный микроскоп использует лазерный луч для формирования точечного источника света через освещенное точечное отверстие для сканирования каждой точки в фокальной плоскости образца. Освещенная точка на образце отображается в точечном отверстии для обнаружения и принимается по точкам или линиям фотоумножителем (ФЭУ) или термоэлектрическим устройством связи (cCCD) после точечного отверстия для обнаружения, быстро формируя флуоресцентное изображение на мониторе компьютера. экран. Осветительное отверстие и точечное отверстие обнаружения сопрягаются относительно фокальной плоскости объектива. Точки в фокальной плоскости одновременно фокусируются на точечном отверстии освещения и эмиссионном отверстии, а точки за пределами фокальной плоскости не будут отображаться в точечном отверстии обнаружения. В результате получается конфокальное изображение, представляющее оптическое сечение образца, что устраняет недостаток размытых изображений в традиционной микроскопии.
3. Области применения: медицина, исследования животных и растений, биохимия, бактериология, клеточная биология, ткани и эмбрионы, пищевые науки, генетика, фармакология, физиология, оптика, патология, ботаника, нейробиология, морская биология, материаловедение, электроника, механика, нефтяная геология и минералогия.
