С помощью какого микроскопа можно увидеть форму микробных клеток?
Собирательный термин для всех крошечных организмов, которые человеку трудно наблюдать невооруженным глазом. К микроорганизмам относятся бактерии, вирусы, грибки и некоторые водоросли. (Однако некоторые микроорганизмы видны невооруженным глазом, например грибы, принадлежащие к грибкам, Ganoderma lucidum и т. д.) Вирусы представляют собой тип «неклеточных организмов», состоящих из нескольких компонентов, таких как нуклеиновые кислоты и белки, но их выживание должно зависеть от живых клеток. В зависимости от существующих сред их можно разделить на прокариотические микроорганизмы, космические микроорганизмы, грибковые микроорганизмы, дрожжевые микроорганизмы, морские микроорганизмы и т. д.
Роль и вред микроорганизмов:
Одним из важнейших воздействий микроорганизмов на человека является распространенность инфекционных заболеваний. 50 процентов болезней человека вызываются вирусами. История микробов, вызывающих болезни человека, — это история постоянной борьбы человека с ними. Человечество добилось больших успехов в профилактике и лечении болезней, но продолжают возникать новые и вновь появляющиеся микробные инфекции, такие как большое количество вирусных заболеваний, для которых не хватает эффективных терапевтических препаратов. Патогенетический механизм некоторых заболеваний не ясен. Злоупотребление большим количеством антибиотиков широкого спектра действия вызвало сильное селекционное давление, в результате чего многие штаммы мутировали, что привело к возникновению лекарственной устойчивости, а здоровью человека угрожают новые угрозы. Некоторые сегментированные вирусы могут мутировать путем рекомбинации или рекомбинации. Наиболее типичным примером является вирус гриппа.
Зная конкретное определение микроорганизмов, какой тип микроскопа должен использовать экспериментатор при изучении микроорганизмов, чтобы увидеть, и какой микроскоп можно использовать, чтобы лучше видеть, а также наблюдать и анализировать распространенные микробные формы.
Изобретение микроскопа заключается в том, чтобы иметь возможность видеть улыбающиеся объекты, которые не видны невооруженным глазом. Размеры микроорганизмов очень малы, поэтому их необходимо увеличивать и наблюдать с помощью микроскопа. Кроме того, существует много типов микроорганизмов, поэтому в основном большинство оптических микроскопов могут наблюдать за микроорганизмами, следующий вопрос заключается в том, какой тип микроскопа следует использовать для наблюдения и анализа микроорганизмов. Обычные микроскопы для наблюдения за морфологией микробов включают биологические микроскопы, фазово-контрастные микроскопы, инвертированные микроскопы, флуоресцентные микроскопы и конфокальные микроскопы. Микроскоп и так далее.
Ниже описаны различные микроскопы, используемые для наблюдения за микроорганизмами:
1. Обычный световой микроскоп
В качестве источника света используется естественный свет или свет, длина волны которого составляет около {{0}},4 мкм. Разрешение микроскопа составляет половину длины волны, то есть 0,2 мкм, а наименьшее изображение, видимое невооруженным глазом, составляет 0,2 мм. Следовательно, использование масляного (иммерсионного) зеркала с увеличением в 1000 раз может увеличить частицы размером 0,2 мкм до 0,2 мм, видимых невооруженным глазом. Обычные оптические микроскопы можно использовать для наблюдения за бактериями, актиномицетами и грибами.
2. Микроскопия в темном поле обычно используется для наблюдения неокрашенной микробной морфологии и движения. После установки в обычный микроскоп темнопольного конденсора свет не может проникать прямо из середины, и поле зрения становится темным. Когда на образец попадает косой свет от края конденсора, он может рассеиваться, поэтому на фоне темного поля можно наблюдать яркие микроорганизмы, такие как бактерии или спирохеты.
3. Фазово-контрастный микроскоп Фазово-контрастный микроскоп использует световой эффект фазово-разностной пластины для изменения световой фазы и амплитуды прямого света и преобразования световой фазы в разницу интенсивности света. Под фазово-контрастным микроскопом при прохождении света через неокрашенный препарат различие световой фазы обусловлено несоответствием плотности различных участков препарата и можно наблюдать морфологию, внутреннее строение и способ движения микроорганизмов.
4. Флуоресцентный микроскоп Флуоресцентный микроскоп в основном такой же, как и обычный оптический микроскоп, основное отличие состоит в источнике света, фильтре и конденсоре. В настоящее время в большинстве из них используются эписветовые приборы, а в качестве источников света обычно используются ртутные лампы высокого давления, которые могут излучать ультрафиолетовый или сине-фиолетовый свет. Существует два типа фильтров: фильтр возбуждения и фильтр поглощения. В дополнение к обычным конденсорам светлого поля, конденсоры темного поля также могут использоваться в флуоресцентных микроскопах, использующих синий свет для усиления контраста между флуоресценцией и фоном. Этот метод применим для обнаружения или идентификации бактерий, окрашенных флуоресцентными пигментами или в сочетании с флуоресцентными антителами.
5. В электронных микроскопах в качестве источника света используется поток электронов. По сравнению с видимым светом длина волны отличается в десятки тысяч раз, что значительно улучшает разрешение. В качестве оптической системы усиления используется магнитная катушка, причем увеличение может достигать десятков тысяч или сотен тысяч раз. Он часто используется в вирусных частицах. и наблюдение ультраструктуры бактерий.
Наблюдение за неокрашенными микробными образцами:
Неокрашенные образцы обычно можно использовать для наблюдения за морфологией, силой и движением бактерий. Бактерии бесцветны и прозрачны, если их не окрашивать, и их можно наблюдать под микроскопом в основном по разнице между показателем преломления бактерий и окружающей среды. Бактерии со жгутиками движутся энергично, а бактерии без жгутиков демонстрируют неравномерное броуновское движение. Жизнеспособные бактерии, такие как Treponema pallidum, Leptospira и Campylobacter, имеют характерную форму и характер движения, что имеет диагностическое значение. Обычно используемыми методами являются метод перепада давления, метод подвесной капли и капиллярный метод.
1. Метод висячей капли Нанесите вазелин вокруг вогнутого отверстия чистого вогнутого предметного стекла, возьмите кольцо бактериальной суспензии с петлей для посева и поместите его в центр покровного стекла, затем совместите вогнутое отверстие вогнутого предметного стекла с каплю в центре покровного стекла и наденьте крышку, затем быстро переверните ее, слегка прижмите покровное стекло, чтобы оно плотно прилипло к вазелину на краю вогнутого отверстия, а затем наблюдайте под мощным микроскоп (или темное поле).
2. Возьмите кольцо бактериальной суспензии с петлей для посева и поместите его в центр чистого предметного стекла методом перепада давления и аккуратно накройте бактериальную суспензию покровным стеклом, стараясь избежать образования пузырьков воздуха и предотвратить бактериальная взвесь от перелива. Наблюдение в светлом (или темном) поле под мощным объективом.
3. Капиллярный метод применяется в основном для изучения кинетики анаэробных бактерий. Обычно выбирают длину 60~70мм. После сифонирования суспензии анаэробных бактерий через капилляр с отверстием 0,5-1,0 мм запаивают два конца капилляра пламенем. Капилляр фиксировали на предметном стекле пластиковой бумагой и наблюдали под мощным объективом в темном поле.
Наблюдение окрашенных микробных препаратов под микроскопом:
После окрашивания бактериального образца из-за резкого цветового контраста между бактериями и окружающей средой можно определить морфологические характеристики бактерий (такие как размер, форма, расположение и т. д.) бактерий и некоторые специальные структуры. хорошо видны под обычным оптическим микроскопом (например, капсулы, жгутики, споры и т. д.), а бактерии можно классифицировать и идентифицировать по реактивности окрашивания.
(1) Общая процедура бактериального окрашивания Общая процедура бактериального окрашивания: мазок (высушивание) – фиксация – окрашивание.
1. Мазок Приготовление крови, выделений, экскрементов, пункционной жидкости и жидкой культуры, а также прямые тонкопленочные мазки на предметных стеклах; вскрытие или зараженные ткани животных, мазок очага поражения ватным тампоном для забора. Для подготовки бактериальных колоний или газонов на твердой среде сначала используйте инокуляционную петлю, чтобы взять кольцо физиологического раствора и поместить его в центр предметного стекла, затем используйте стерильную инокуляционную петлю, чтобы взять небольшое количество культуры и растереть ее. равномерно распределить в физиологическом растворе и распределить на 1 см2. Большие или малые окрашенные поверхности, дать высохнуть естественным путем при комнатной температуре или медленно высушить на расстоянии.
2. Целью фиксации является уничтожение бактерий, коагуляция бактериального белка и структуры и облегчение окрашивания; способствовать прилипанию бактерий к предметному стеклу, чтобы их не смыло водой во время мытья; изменяют проницаемость бактерий для красителей, что благотворно влияет на структуру окрашивающих клеток бактерий. Обычно его фиксируют нагреванием пламенем, и высушенный мазок быстро пропускают через пламя 3 раза. Кожу на тыльной стороне ладони при прикосновении к предметному стеклу лучше не обжигать.
3. Окрашивание В соответствии с различными целями проверки выберите различные методы окрашивания. При окрашивании добавляйте раствор красителя по каплям, чтобы увеличить покрытие.
4. Протрава Любое вещество, способное усиливать сродство между красителем и окрашиваемым объектом, фиксировать краску на окрашиваемом объекте и вызывать изменение проницаемости клеточной мембраны, называется протравой. Обычно используются квасцы, дубильная кислота, соли металлов, йод и т. д., а нагревание также используется для усиления окраски. Морилки можно использовать между первичным окрашиванием и контрастным окрашиванием, а также их можно использовать после фиксации или содержать в составе фиксатора и окрашивания.
5. Обесцвечивание. Любой химический агент, который может удалить цвет окрашенного объекта, называется обесцвечивателем. В качестве обесцвечивателей обычно используются этанол, ацетон и т. д. Обесцвечивающий агент может определять степень стабильности комбинации бактерий и красителей, которую можно использовать для дифференциального окрашивания.
6. Контрастное окрашивание Бактерии или их структуры, которые были обесцвечены, часто докрашивают контрастным раствором для облегчения наблюдения. Цвет раствора для контрастного окрашивания отличается от цвета раствора для первичного окрашивания, что создает резкий контраст. Контрастное окрашивание не должно быть слишком сильным, чтобы не перекрыть цвет первоначального окрашивания.
