Принципы работы и структурные характеристики флуоресцентных микроскопов.
Флуоресцентный микроскоп использует высокоэффективный точечный источник света для излучения света определенной длины волны (например, ультрафиолетового света 3650 или пурпурно-синего света 4200) через систему цветных фильтров в качестве возбуждающего света, который возбуждает флуоресцентные вещества в образце, излучая различные цвета флуоресценции, а затем наблюдает с помощью увеличения объектива и окуляра. Таким образом, даже при слабой флуоресценции на сильном фоне его легко распознать и он обладает высокой чувствительностью. Он в основном используется для изучения структуры, функций и химического состава клеток. Базовая структура флуоресцентного микроскопа состоит из обычного оптического микроскопа и некоторых аксессуаров, таких как источник флуоресцентного света, фильтр возбуждения, двухцветный светоделитель и блокирующий фильтр. В качестве источника флуоресцентного света - обычно используются ртутные лампы сверх-высокого давления (50–200 Вт), которые могут излучать свет различной длины волны, но каждое флуоресцентное вещество имеет длину волны возбуждающего света, обеспечивающую самую сильную флуоресценцию. Поэтому необходимо добавить фильтры возбуждения (обычно ультрафиолетовые, фиолетовые, синие и зеленые фильтры возбуждения), чтобы пропускать только определенную длину волны возбуждающего света и облучать образец, поглощая при этом весь остальной свет. После облучения возбуждающим светом каждое вещество излучает видимую флуоресценцию с длиной волны, превышающей длину волны облучения, за очень короткий период времени. Флуоресценция имеет специфичность и обычно слабее, чем возбуждающий свет. Чтобы наблюдать специфическую флуоресценцию, за объективом необходимо добавить блокирующий (или подавляющий) фильтр.
Его функции двояки: во-первых, поглощать и блокировать попадание возбуждающего света в окуляр, чтобы избежать нарушения флуоресценции и повреждения глаз; во-вторых, выбрать и пропустить определенную флуоресценцию, демонстрируя определенный флуоресцентный цвет. Два типа фильтров необходимо использовать в сочетании.
