Особая конструкция флуоресцентного микроскопа включает в себя:
(I) Система цветных фильтров
Цветной фильтр является важной частью флуоресцентного микроскопа, его основные компоненты состоят из светофильтра возбуждения (первый барьерный фильтр), эмиссионного светофильтра (второй барьерный фильтр), а также полупрозрачного и полуантифильтрационного состава (светоделительное зеркало). . У различных производителей моделей цветных фильтров название зачастую не единообразное.
1. Световой фильтр возбуждения и светофильтр эмиссии: в зависимости от источника света и характеристик флуорохрома обычно выбирают следующие три типа согласования, чтобы обеспечить определенный диапазон длин волн возбуждающего света и обеспечить возбуждение флуоресценции образца посредством окуляр для изображения.
УФ-возбуждение: Световой фильтр возбуждения пропускает УФ-излучение и блокирует прохождение видимого света с длиной волны выше 400 нм. Соответствующий эмиссионный фильтр пропускает синий свет, который в поле зрения кажется синим, например, при окрашивании DAPI.
Возбуждение синим светом: Световой фильтр возбуждения пропускает синий свет, блокируя свет других длин волн. Соответствующий эмиссионный фильтр пропускает зеленый свет, например, для маркеров окрашивания GFP.
Зеленое возбуждение: фильтр возбуждения пропускает зеленый свет, блокируя волны других длин волн. Соответствующий эмиссионный фильтр обычно пропускает красный свет, например, при окрашивании родамином.
2. Полупрозрачный и полуотражающий фильтр: его роль заключается в полной блокировке возбуждения света за счет отражения; и через соответствующий диапазон длин волн излучаемого света. Его модель и возбуждение светофильтров и излучение светофильтров соответствуют.
(Б) объектив и окуляр
Можно использовать различные объективы, но * лучше выбирать симметричные ахроматические объективы, поскольку их автофлуоресценция очень мала, а свойства светопропускания (диапазон длин волн) подходят для флуоресценции. Поскольку яркость флуоресценции изображения в поле зрения микроскопа пропорциональна квадрату дульной скорости объектива и обратно пропорциональна его увеличению, то для улучшения яркости флуоресцентного изображения необходимо использовать объектив с большой дульной скоростью. использоваться. Особенно если флуоресценция образцов недостаточно сильна, следует использовать объектив с большим отверстием, высоким светопропусканием и как можно более низким окуляром.
(C) другие оптические устройства
Отражатель, его отражающий слой обычно покрыт алюминием, поскольку алюминий в ультрафиолетовом и видимом свете поглощает сине-фиолетовую область меньше, отражая до 90% и более (в то время как отражательная способность серебра составляет всего 70%). Обычно используются плоские отражатели. Зеркало-прожектор, разработанное и изготовленное специально для флюоресцентной микроскопии. Зеркало-прожектор, изготовленное из кварцевого стекла или другого стекла, прозрачного для УФ-излучения. Устройство падающего света, которое, помимо функции источника проходящего света, больше подходит для непрозрачных и полупрозрачных образцов, таких как толстая пленка, фильтрующая мембрана, колония, тканевая культура и другие образцы для прямого наблюдения. В последние годы началась разработка нового типа флуоресцентного микроскопа с использованием устройства падающего света, называемого падающим флуоресцентным микроскопом.
(D) источник света
В настоящее время в качестве источника света используется ртутная лампа высокого давления мощностью 50 или 100 Вт. Работа разряда двух электродов, вызванная испарением ртути, шар давления воздуха быстро поднимается (этот процесс обычно занимает около 5 ~ 15 минут), и в процессе излучения квантов света длина волны излучаемого света достаточна для возбуждения все типы флуоресцентных веществ, поэтому для флуоресцентной микроскопии обычно используются.
Ртутные лампы имеют относительно короткий срок службы, обычно 200 часов, и в ответ на это ограничение срока службы в последние годы широко использовался новый люминесцентный источник света X-Cite, обеспечивающий длительный срок службы лампы (2000 часов) и возможность гибкого использования. - не требуется предварительный нагрев, он готов к использованию прямо из коробки.
